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人大肠癌抗原基因 cDNA噬菌体表达文库的构建和鉴定 |
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| 人大肠癌抗原基因 cDNA噬菌体表达文库的构建和鉴定 |
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【摘要】 目的: 为获得大肠癌的特异性抗原基因, 构建人大肠癌抗原基因的 cDNA噬菌体表达文库。方法: 从2株人大肠癌细胞CCL187和CX1中提取总RNA, 分离纯化mRNA, 并以此为模板合成第1 链 cDNA, 用置换法合成第2 链 cDNA。双链 cDNA 经末端削平、 EcoRⅠ接头连接、 XhoⅠ 酶切、 过柱分级分离, 除去<400 bp 片段。收集符合需要的cDNA片段与噬菌体ZAP Express载体连接, 体外包装后获得人大肠癌抗原基因的cDNA噬菌体表达文库。结果: 构建的人大肠癌抗原基因的cDNA噬菌体文库, 原始库容量为2.3×109 pfu/L, 重组率97%。重组子插入cDNA片段平均大小1 kb以上。结论: 成功地构建高质量的人大肠癌抗原基因的cDNA噬菌体表达文库, 为大肠癌的特异性抗原筛选奠定了基础。
【关键词】 人大肠癌; 噬菌体; cDNA表达文库
［Abstract］ AIM: To construct a cDNA phage expression library of colorectal carcinoma antigens for screening colorectal carcinoma specificantigens. METHODS: The total RNA was extracted from two colorectal carcinoma cell lines CCL187 and CX1 . The mRNA from total RNA was isolated to synthesize the first and second strand cDNA. The dscDNA termini were blunted with pfu DNA polymerase. The blunted cDNAs were ligated with EcoRⅠadapters and then digested by XhoⅠ. Small cDNA molec [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] [8] [9] 下一页 |
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