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【摘要】 目的: 构建大鼠CD36真核表达载体, 并在293T细胞中表达。方法: 应用RTPCR技术, 从大鼠肺泡巨噬细胞NR8383细胞提取的总RNA中, 获得CD36基因编码序列片段, 克隆至真核表达载体pEGFPN1中, 对重组质粒进行酶切和测序鉴定后, 以脂质体介导法转染至293T细胞, 通过荧光显微镜和Western blot检测其在293T细胞中的表达。结果: 酶切和测序证明重组真核表达载体pEGFPN1CD36构建成功, 荧光显微镜及Western blot确认目的基因序列在293T细胞中过表达。结论: 成功构建大鼠CD36基因的重组真核表达载体pEGFPN1CD36, 并在293T细胞中过表达。
【关键词】 CD36; 真核表达载体; 293T细胞; 表达
CD36是一种相对分子质量（Mr）为88 000的细胞表面单链糖蛋白, 属于B 类清道夫受体, 在体内血小板、 内皮细胞以及巨噬细胞等多种细胞表面表达, 因其能与多种配体结合而具有复杂的生物学功能［1］。CD36是血小板反应素1（trombospondin1, TSP1）的受体, 通过与TSP1在细胞表面发生特异性结合参与转化生长因子β1（transforming growth factorβ1, TGFβ1）的活化、 介导TSP1抗血管生成作用, 在纤维化、 抗血管生成、 肿瘤免疫等方面有重要作用［1］。国内外研究表明, CD36与TSP1特异性结合是TGFβ1活化过程中的关键环节, 而TGFβ1又与肺纤维化的发生发展密切相关［2, 3］。在本实验中, 我们克隆了大鼠CD36基因, 并构建其真核表达载体, 为进一步研究其功能奠定基础。
1 材料和方法
1.1 材料 质粒pEGFPN1购自Clontech公司, 大肠杆菌DH5α购自Amersham biosciences公司, 293T细胞购自中科院细胞库, NR8383细胞购自ATCC细胞库。TRIzol试剂、 Lipofectamine [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] 下一页 |
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