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原发性肝癌组织双向电泳技术优化           
原发性肝癌组织双向电泳技术优化

【摘要】  【目的】 优化双向凝胶电泳的实验步骤,

  原发性肝癌(以下简称肝癌)是我国最常见的恶性肿瘤之一,死亡率在我国恶性肿瘤中位居第二[1]。蛋白质组学是研究肿瘤发生机制[2],寻找肿瘤标志物的重要工具,对于肝癌发生机制和治疗作用靶点的研究具有重要意义[3]。我国早在2003年就启动了人类肝脏蛋白质组计划(HUPO),并取得了一定的研究成果。但关于肝癌组织双向电泳的技术却少完整系统的报道,为了建立高分辨率可重复的肝癌组织双向凝胶电泳技术,我们对人肝癌组织的双向电泳技术中的关键环节进行了研究对比,优选出一套适合肝癌组织的双向凝胶电泳方法,供从事肝脏蛋白质组学双向电泳的技术人员参考。

  1 材料与方法

  1.1 材 料

  1.1.1 标本采集

  原发性肝癌组织来自我院肝癌切除术患者。组织离体后立即以预冷PBS冲洗,在冰上分装置入冻存管,液氮中速冻,后转入-80 ℃冰箱中保存备用。所有病例均经术后病理证实为原发性肝细胞癌。

  1.1.2 试 剂

  丙烯酰胺、甲叉双丙稀酰胺、过硫酸胺、四甲基乙二胺(TEMED)、三羟甲基氨基甲烷 (Tris)、尿素、十二烷基硫酸钠(SDS)、3-[3-(胆酰氨基丙基)二甲氨基]丙磺酸盐(CHAPS)、二硫苏糖醇(DTT)、甘氨酸、IPG缓冲液(pH 3 ~ 10)、蛋白酶抑制剂、碘乙酰氨(IAA)、硫脲、18 cm 胶条(pH 3 ~ 10 NL)均为Amersham公司产品。TCA、丙酮为Sigma公司产品。无水乙醇为国产分析纯(广州化学试剂厂),所有溶液均用去离子水配制。

  1.1.2 主要设备

  Immobiline Dry Strip,Ettan IPG 3等电聚焦电泳仪,Ettan DALT six 600 垂直电泳槽,Imagescanner高密度扫描仪,ImageMaster软件均购自Amersham公司。

  1.2 方 法

  1.2.1 蛋白质样品制备

  粗样本制备:取肝癌组织100 mg,液氮冷冻研磨,加入0.5 mL裂解液(含1

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