1.3 实验方法

　　1.3.1 诱导痰的采集和处理

　　由喷射式雾化仪吸入3%高张盐水10 ～ 15 min，将咳出的痰液收集至约1 mL，取0.5 g左右黏稠痰液，加入适量的裂解液(0.1%DTT)，混匀后37 ℃水浴10 min并振荡10 min。将痰液用40 μm滤网过滤，1 500 × g离心10 min，细胞沉渣置于PBS中涂片，以甲醇固定，经White Giemasa染色，如痰样镜检中鳞状上皮细胞占有核细胞比例 < 20%，则认为样本合格。计数200个非上皮细胞进行细胞分类，分类计算中性粒细胞、嗜酸性粒细胞的百分比。

　　1.3.2 外周血单个核细胞(PBMC)的分离和培养

　　所有急性期患者于治疗前静脉采血2 mL，EDTA抗凝，PBS等体积稀释，缓慢加入淋巴细胞分离液上，1 500 × g离心20 min。吸取中间白膜层，以PBS充分洗涤2次，1 000 × g离心10 min，加入RPMI1640培养液重悬PBMC，调整细胞密度为1 × 109/L。将PBMC1 × 109细胞/L培养于96孔培养板中，加入anti-CD3(OKT3) (0.2 mg/L) + antiCD28(1 mg/L)共培养。培养板置于37 ℃，体积分数5%CO2，饱和湿度培养箱中培养，72 h后收集上清存放至-80 ℃冰箱。

　　1.3.3 外周血单个核细胞(PBMC)培养上清IL-17的测定

　　按照ELISA试剂盒说明书测定PBMC培养上清IL-17水平，单位为pg/mL。

　　1.3.4 血细胞形态的测定

　　血细胞形态：静脉采血1 mL涂片后，经HE染色和White Giemasa染色，分类计算中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞的百分比并观察各细胞的形态。

　　1.4 统计学方法

　　实验数据采用SPSS 16.0统计软件进行数据整理和分析，符合正态分布连续性计量资料用均数符合正态分布连续性计量资料用均数 ± 标准差(x ± s)表示，两组均数比较采用独立样本t检验，多组均数比较采用方差分

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