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华支睾吸虫乳酸脱氢酶E10-20及E94-102表位的克隆表达与生物学特性初步研究           
华支睾吸虫乳酸脱氢酶E10-20及E94-102表位的克隆表达与生物学特性初步研究
DF膜为Millipore公司产品;HRP标记的山羊抗大鼠IgG(H + L)、DAB显色试剂盒为武汉博士德生物工程有限公司产品。

  1.3 方 法

  1.3.1 目的基因获取

  根据表位DNA序列及克隆载体pGEX-4T-1多克隆酶切位点设计目的基因。E10-20,P:5′-gatccCCAGCTGATGCTAGATCTCGC CCGAGGACGAAGTAAc-3′;N:5′-tcgagTTACTTCG TCCTCGGGCGAGATCTAGCATCAGCTGGg-3′;E94-102,P: 5′-gatccGCTCGTCAGAATGAAGGAGAATCCAG GTAAc-3′;N:5′-tcgagTTACCTGGATTCTCCTTCAT TCTGACGAGCg-3′;其中,P:5′端下划线所示序列为BamHⅠ限制性核酸内切酶所识别序列(gatccg)经该酶酶切后序列,P:3′端下划线所示序列为XhoⅠ限制性核酸内切酶所识别序列(gtcgag)经该酶酶切后序列;N:5′及N:3′为P:3′及P:5′序列的互补序列。以上基因序列均由上海英骏生物技术有限公司合成。将合成的各单链稀释成1 nmol/mL,相应的正反两链等体积混合,室温放置2 h后,4 ℃放置30 min,
  Zhou Z, Xia H, Huang Y, et al. Oral administration of a Bacillus subtilis spore-based vaccine expressing Clonorchis sinensis tegumental protein 22.3 kDa confers protection against Clonorchis sinensis[J]. Vaccine, 2008, 26(15):1817-1825.

  胡旭初,徐 劲,吕 刚,等. 华支睾吸虫乳酸脱氢酶(CsLDH)基因的识别及其结构与功能分析 [J]. 热带医学杂志,2007,7(12):1145-1148.

  黄 灿,胡旭初,余新炳,等. 华支睾吸虫乳酸脱氢酶(CsLDH)亚细胞及虫体组织定位 [J].

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