浅述奶牛传染病检测和预防措施

　一、材料与方法
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　　乙型肝炎诊断试剂盒购于上海某生物有限公司；牛传染性胸膜肺炎补体结合反应抗原、标准阴性血清和阳性血清、溶血素补体由某生物制品厂提供；牛传染性鼻气管炎抗原、IBR弱毒株、阳性血清购于中国兽医药品监察所，阴性血清取自检查牛；奶牛血清来源于某省市的奶牛场和奶牛专业户。
　　2.方法
　　(1)酶联免疫吸附试验检测奶牛类人乙型肝炎
　　①每孔加入待检样品50μL，设阴、阳性对照各2孔，每孔50μL，并设空白对照1孔。②手工洗板，弃去孔内液体，洗涤液注满每孔静置5s，甩干、重复5次。③每孔加入酶结合物50μL(空白对照除外)，充分混匀，封板，置37℃孵育30min。④重复操作②。⑤每孔加显色剂A液、B液各50μL，充分混匀，封板，置37℃孵育15min。⑥每孔加入终止液50μL，混匀。⑦用酶标仪读数，取波长在450nm，先用空白孔校零，然后读取每孔D值。
　　(2)类人乙型肝炎病理形态学观察
　　用肝脏穿刺法观察类人乙型肝炎病理形态学。用长12～15cm，内径3mm的长注射针头对20头奶牛11～12肋间进行穿刺，取肝脏组织活体样本，将其保存于10％福尔马林中。同时解剖HBsAg、HBeAg双阳性奶牛，做病理切片观察。用HE、VanGieson-氏、过碘酸一苯肼Schiff(PAS)希夫氏染色法分别对肝脏组织切片.进行染色，同时用透视电镜做超微结构观察。另将一部分肝脏组织活体样本放在灭菌的平皿中，剪碎研磨，用灭菌生理盐水稀释后，吸取上清液1.5mL，置Eppendorf管中，经差数离心和饱和硫酸铵沉淀，初提物再经150、300、500g/L蔗糖梯度离心，PEG浓缩后，负染，电镜观察病毒颗粒。
　　(3)补体结合反应检测牛传染性胸膜肺炎
　　血清(包括被检血清(样品血清)、阳性血清(补体结合试验标准血清)、阴性血清(补体结合试验标准血清)、致敏红细胞(对照)、抗原(对照)孔分别加入抗原(补体结合试验抗原)，阴性血清对照孔、致敏红细胞对照孔不加抗原；然后分别加入补体，致敏红细胞对照孔不加补体；再加入灭菌巴比妥缓冲液，振荡混匀后置37

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