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作者：李先佳 任丽平 王家国
【关键词】 黄酮;多糖; 糖尿病
糖尿病是我国中老年人常见的疾病，病情发展与血糖浓度、胰岛素水平、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)的变化密切相关。自20世纪70年代以来人们研制了一系列治疗糖尿病的天然药物。Yoshikawa等发现爱神木叶(巴西的一种传统糖尿病的天然药物)具显著的抑制α糖苷酶作用,其降糖活性成分为6种黄酮醇类〔1〕;《本草纲目》记载,将桑叶“炙熟煎饮,代茶止渴”〔2〕;国内陈福君等曾报道桑叶多糖有降血糖作用〔3〕。近年来研究证实，黄酮通过抗氧化机制清除自由基，保持胰岛β细胞的结构完整，从而降低糖尿病患者血糖水平，并阻止并发症的发生〔4〕。桑叶多糖促进β细胞分泌胰岛素，促进细胞对糖的利用、肝糖原合成以及改善糖代谢，最终达到降血糖的效果〔3〕。为进一步明确桑叶降血糖的作用及可能机制，本文就桑叶黄酮和多糖对2型糖尿病大鼠血糖、胰岛素、TC、TG的影响进行研究，为临床治疗提供依据。
1 材料与方法
1.1 试剂及药品 诺和灵R(人胰岛素，丹麦诺和诺德公司)，三氯乙酸(天津化学试剂公司);树脂AB8(上海试剂四厂);链脲佐菌素(STZ，美国Sigma公司);试剂盒(南京建成生物科技研究所);血糖仪及血糖试纸(罗氏公司)。
1.2 桑叶黄酮和多糖的提取和纯化
1.2.1 桑叶黄酮提取和纯化 桑叶→干燥→粉碎→醇提(回流1 h)→抽滤→粗提黄酮→树脂AB8→70%乙醇洗脱→黄酮。
1.2.2 桑叶多糖提取和纯化 桑叶→石油醚回流脱脂→乙醇→蒸馏水→加热沸腾→过滤→浓缩→离心→醇沉→溶解→三氯醋酸滴定→浓缩离心→D101大孔树脂→水洗脱→浓缩→离心→溶解→活性碳→浓缩醇沉→无水乙醇、丙酮分别进行冲洗→白色精制多糖。
1.3 动物模型的建立与分组 40只SD大鼠适应环境2 w后随机分为2组:10只正常对照组、30只糖尿病组。正常对照组喂以普通高糖饮食,其中：碳水化合物60%,蛋白质22%,脂肪10%,其他8%。糖尿病喂以高脂饮食,其中：碳水化合物40%,蛋白质13%,脂肪40%,其他7%。喂养3个月后,糖尿病组一次性腹腔注射STZ 25 mg/kg体重,其他两组均腹腔注射柠檬酸缓冲液。72 h后尾静脉取血,分别测血糖及胰岛素，凡血糖浓度>9 mmol/L，尿糖呈强阳性者，并出现多饮、多食、多尿者做为糖尿病模型。30只SD大鼠均为糖尿病大鼠。糖尿病组大鼠再随机分为3组，模型组、多糖组和黄酮组，每组10只。各组喂饲普通饲料，自由饮水外，每天以蒸馏水灌胃(2 ml/d)。黄酮组大鼠给予桑叶黄酮10、20、40 mg/kg和多糖组给予多糖50、100、150 mg/kg灌胃。各组大鼠分别取1、10、20 d空腹静脉血，测定血糖和胰岛素的浓度。
1.4 血清的制备 末次给药后禁食7 h摘眼球取血，离心后血浆采用GODPAP法测血糖，放射免疫法测定血清胰岛素、TC、TG的测定按试剂盒说明进行操作。
1.5 统计学方法 数据以x±s表示，用SPSS10.0软件行t检验。
2 结 果
2.1 各组造模前后血糖变化 与造模前比较，造模后模型组、多糖组和黄酮组血糖均显著升高，差异显著，建模后彼此差异不大，正常对照组为(5.29±1.21)mmol/L。见表1。表1 各组模型建立前后血糖的变化与本组造模前比较：1)P<0.05，2)P<0.01
2.2 实验后各组血清葡萄糖含量的变化 与模型组〔(18.14±1.14) mmol/L〕比较，50、100、150 mg/kg多糖组〔(6.24±1.12)、(5.13±1.14)和(4.87±1.29) mmol/L〕(P<0.05，P<0.01，P<0.01)和10、20、40 mg/mg黄酮组〔(6.43±1.22)、(5.19±0.17)、(5.11±0.11) mmol/L〕(均P<0.01)的血糖浓度明显下降，其中黄酮组的效果明显。
2.3 实验后各组胰岛素的变化 与模型组〔(6.21±1.35) U/L〕比较，50、100、150 mg/kg多糖组〔(9.78±6.35)、(10.12±7.16)、(10.21±7.18)U/L〕(P<0.05，P<0.01，P<0.01)和10、20、40 mg/mg黄酮组〔(9.85±5.97)、(10.15±5.69)、(13.68±6.39)U/L〕(P<0.05，P<0.01，P<0.01)空腹胰岛素含量均明显提高。 2.4 实验后胆固醇的变化 与模型组〔(8.47±0.59) mmol/L〕比较，50、100、150 mg/kg多糖组〔(5.60±1.27)、(4.29±0.47)、(4.21±1.11)mmol/L〕(P<0.05，P<0.01，P<0.01)和10、20、40 mg/mg黄酮组〔(5.81±0.14)、(4.11±0.17)、(4.10±0.19)mmol/L〕(P<0.05，P<0.01，P<0.01)TC含量均明显下降，其中黄酮组变化差异性比较大。
2.5 实验后TG的变化 与模型组〔(5.14±0.32)mmol/L〕比较，50、100、150 mg/kg多糖组〔(2.0±0.11)、(1.51±0.12)、(1.48±0.18)mmol/L〕(P<0.05，P<0.01，P<0.01)和10、20、40 mg/mg黄酮组〔(2.17±0.11)、(1.57±0.16)、(0.24±0.13)mmol/L〕(P<0.05，P<0.01，P<0.01)TG含量下降，两种成分对TG的处理均有明显的作用。
3 讨 论
桑叶中含有丰富桑叶黄酮，同时含有丰富的胡萝卜素、槲皮素、酚类化合物、维生素C等。桑叶黄酮通过抗氧化机制清除自由基，保持胰岛β细胞的结构完整、维持其正常生理功能，从而降低糖尿病患者的血糖水平，并阻止并发症发生。本实验通过对糖尿病大鼠灌胃法给药，用药后血糖值明显下降,平均降低(5.13±1.14) mmol/L,与模型组的差异有显著性，胰岛素的含量一直维持在正常的变化范围内，TG和TC的量达到了明显的降低作用，减轻肝脏和肾脏的负担具有较好的效果，抑制相关并发症的复发。桑叶多糖降低血糖、血脂和升高胰岛素水平的作用机制一方面是对激素水平的影响，另一方面是促进胰岛素的分泌和修复胰岛β细胞〔6〕。从实验结果可以看出，在实验开始时各组糖尿病大鼠的胰岛素明显比模型组低，给予桑叶黄酮和桑叶多糖灌胃1、10、20 d后，各实验组的胰岛素浓度有不同程度升高，剂量越大升高幅度越大，在胰岛素浓度上升的同时，血糖、TG、TC浓度也明显下降，提示桑叶提取液具有部分降血糖能力，其降血糖作用可能与其具有抗氧化活性成分，抑制自由基的产生和加快自由基的清除以及胰岛素的分泌有关。
【参考文献】
1 Yoshikawa M，Shimada H，Nishida N,et al.Antidiabetic principles of natural medicines.Ⅱ.Aldose reductase and alphaglucosidase inhibitors from Brazilian natural medicine，the leaves of Myrcia multiflora DC.(Mytaceae)：structures of myrciacitrinsⅠandⅡand myrciaphenones A and B〔J〕.Chem Pharm Bull(Tokyo),1998;46(1):1139.
2 李时珍(王首杰整理).本草纲目〔M〕.北京：人民卫生出版社，1999：18678.
3 陈福君,卢 军,张永煜.桑的药理研究(Ⅰ):桑中降血糖有效组分对糖尿病动物糖代谢的影响〔J〕.沈阳药科大学学报，1996;13(1):247.
4 俞录莺，李向荣.植物黄酮抗糖尿病及其并发症的研究进展〔J〕.国外医学·卫生学分册，2000;27(6):3314.
5 陈 秋，夏永鹏，邱宗荫.2型糖尿病大鼠模型的建立与评价〔J〕.天津医药，2006;34(1)：335.
6 徐 庆,滕俊英.植物多糖的降血糖作用与机理〔J〕.中国食物与营养，2004;32(8)：412. |
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