甘草根侧枝干燥切片。
甘草多糖提取方法：称取已干燥的甘草250 g,加入适量80%乙醇过夜,回流提取3 h脱脂,药渣挥尽乙醇后,沸水提取2次,每次2 h。合并提取液,浓缩至200 mL,加95%乙醇使醇含量达到80%,于4 ℃冰箱中醇沉过夜。抽滤,滤渣依次用无水乙醇、丙酮洗涤,得到粗多糖。将粗多糖溶于水,用Sevage法除蛋白,反复进行3次至无蛋白。流水透析后,蒸发浓缩至200 mL,加95%乙醇使醇含量达到80%,于4 ℃冰箱中醇沉过夜。抽滤,滤渣依次用无水乙醇、丙酮洗涤,真空干燥。即得甘草多糖,得率为4.02%。
1.3 仪器与试剂
酶标仪(美国Organon Teknika公司)。生理盐水(四川科伦大药厂生产),批号A000586.08。小鼠IFN-γ ELISA试剂盒(深圳晶美生物工程有限公司)。
1.4 抗原制备
取市售鸡蛋,将壳击碎后取卵清1∶5倍稀释备用。
2 实验方法
2.1 分组及给药
取小鼠48只,随机分为4组,每组12只,分别为甘草多糖低、中、高剂量组及对照组。进行第1次免疫,注射卵清蛋白抗原,剂量为每只小鼠0.2 mL,注射部位为腹股沟。注射抗原后的第3日开始给药,实验组小鼠灌胃给予甘草多糖,给药量分别为50、100、200 mg/(kg?d),对照组小鼠灌胃给予生理盐水,剂量均为每只0.5 mL,连续7 d。第8日进行第2次加强免疫(方法同第1次免疫),继续灌胃给药,1周后,小鼠断头采血,离心分离血清,分装后备检。 2.2 抗体效价测定
2.2.1 卵清蛋白抗体测定
采用酶联免疫吸附试验(ELISA),具体操作按文献[3]进行。以卵清蛋白包被酶标板测定相应抗体,以吸光值A表示抗体水平。
2.2.2 γ-干扰素测定
采用小鼠IFN-γ ELISA试剂盒测定,所有操作均严格按试剂盒 上一页 [1] [2] [3] [4] [5] 下一页 |
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