| 茶藨生柱锈重寄生木霉粗毒素的基本性质 |
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锈孢子。
1.2 试验方法
1.2.1 培养方法将供试菌株接于PDA培养基上扩繁5 d，然后用Φ=0.6 cm的打孔器在培养好的木霉平皿上打孔，将打好的菌块接种在装有100 mL Richard培养液的250 mL三角瓶中，每瓶接种3块，以120 r·min-1振荡培养 (25 ℃ , L∶ D=12 ∶12)，培养液保持自然pH值。每处理重复3次。
1.2.2毒素原液的制备将培养8 d的供试菌株培养物，先用8 层纱布滤去菌丝体，所得的滤液经8 ℃，4 000 r·min-1离心20 min，上清液即为毒素原液。以上操作均在无菌条件下进行。滤液置于4 ℃下保存，备用。
1.2.3生测方法生测采用凹玻片法，即在灭过菌的凹玻片内注入100 μL毒素原液，取少量锈孢子浸于其中，适当搅拌使锈孢子与培养滤液充分接触。盖上盖玻片后置于放有浸湿滤纸的培养皿内，室温下定时观察锈孢子的变化情况，每处理重复3次。按照杨艳红[11]的方法判断锈孢子的活力。
1.2.4毒素原液中蛋白与非蛋白部分的活性测定参照黄丽丹等[12]的方法进行。
1.2.5毒素在不同极性有机溶剂中的分配取相同体积的10份毒素原液，用旋转蒸发仪于50 ℃下浓缩至小体积后，分别加入3倍体积不同极性的有机溶剂(甲醇、乙酸乙脂、氯仿、石油醚、苯、正丁醇、甲醇∶氯仿)，充分振荡后静置过夜，得溶剂相和残留沉淀物（水相）。合并各萃取液于50 ℃下旋转蒸发至干，沉淀物挥去残留的溶剂，用蒸馏水恢复至原体积，取各部分进行生物测定，每处理重复3次。
1.2.6毒素粗提液的制备参照黄丽丹等[12]的方法进行。
1.2.7温度对粗毒素活性的影响参照黄丽丹等[12]的方法并做一定改动。将毒素粗提液置于室温0，50 ，100 ℃恒温水浴锅中和121 ℃、0.1 MP下处理30 min后，将各处理的毒素粗提液进行生物测定，每处理重复3次。
1.2.8 pH值对粗毒素活性的影响采用1 mol·L-1的HC1和NaOH分别调节毒素粗提液的pH 值（5.90）至3.00，4.00，5.00，6.00，7.00，8.00，9.00，以未接菌的相应pH值的培养上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] 下一页 |
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