一例牛病毒性腹泻病例的血清学诊断

　牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus, BVDV）属于黄病毒科，瘟病毒属成员，主要引起牛病毒性腹泻-黏膜病，造成患牛免疫耐受、持续性感染、母牛流产、死胎和畸形胎。20世纪40年代，在加拿大首次发现该论文联盟http://wWW.LWlm.CoM病，之后向其他国产蔓延，目前该病呈世界性分布，给养牛业健康发展带来了巨大障碍。为控制牛病毒性腹泻病毒的传播与蔓延，早期诊断是关键，本研究采用猪瘟胶体金快速检测试纸卡检测牛病毒性腹泻抗体水平。
　　1 材料
　　30份疑似感染牛病毒性腹泻病毒患牛的抗凝血。猪瘟病毒快速检测试纸卡（货号：M371328）购自克格仪器有限公司；牛病毒性腹泻抗原ELISA检测(血清) 试剂盒（货号：99-43810）购自北京祥龙环宇生物技术有限公司。
　　2 方法
　　2.1 应用猪瘟胶体金快速检测试纸卡检测牛病毒性腹泻抗体(血清)
　　2.1.1 操作步骤 从30份患牛抗凝血中分离血清，将分离的血清加入到猪瘟胶体金快速检测试纸卡的检测孔内，50ul/孔，放置于室温中15min后，观察反应结果。编辑：www.ybask.Com 。

　　2.1.2 判定方法 猪瘟胶体金快速检测试纸卡T区（检测线）呈现紫红色，并且C区（对照线）也呈现紫红色时，判定为阳性。当T区不变色，而C区呈现紫红色，则判定为阴性。如果C区不呈现紫红色时，此卡不能使用，为失效检测卡。
　　2.2 应用牛病毒性腹泻抗原ELISA检测试剂盒检测抗体(血清)
　　2.2.1 操作步骤
　　2.2.1.1 编号 将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔，空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同。
　　2.2.1.2 加样 分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
　　2.2.1.3 孵育 用封板膜封板后置37℃孵育30min。
　　2.2.1.4 洗涤 小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置

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