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作者：吕圭源 陈素红 张园 陈雁虹 吕秀娟 华波 颜美秋
【摘要】 ［目的］研究肿节风挥发油（SGE）对环磷酰胺（CTX）治疗H22、S180小鼠的增效和减毒作用。［方法］建立小鼠体内移植性肉瘤、肝癌模型，通过两种给药途径，观察肿节风挥发油与环磷酰胺联合用药对荷瘤小鼠抑瘤率的影响；观察SGE拮抗CTX引起血小板、白细胞及血红蛋白下降。［结果］肿节风挥发油与CTX合用时，对肝癌H22、肉瘤S180两种肿瘤均有不同程度的抑瘤增效作用。CTX（10mg/kg或15mg/kg）分别联用iv.SGE（36.6mg/kg），对小鼠H22、S180的抑瘤率均高于相应剂量的单用CTX（P<0.05）；CTX（20mg/kg）联用ig.SGE（73.2mg/kg），对H22的抑瘤率高于单用CTX（P<0.05）。肿节风挥发油能明显拮抗CTX引起的血小板、白细胞下降（P<0.05～0.01）。［结论］肿节风挥发油能增强CTX的抗肿瘤作用，同时减轻CTX的毒性。
【关键词】 肿节风挥发油 环磷酰胺 增效 减毒
肿节风是金粟兰科草珊瑚属植物草珊瑚Sarcandra glabra (Thunb.) Nakai的干燥全草［1］，又名草珊瑚、九节茶、接骨木。肿节风味苦、辛、性平，归心、肝经。辛能行散，苦凉泄热，即除外侵之风湿，有解内蕴之热毒。肿节风注射液具有抗肿瘤、抗菌消炎、抗病毒作用，适用于肌肉注射，其生产工艺以水煎煮提取，酒精沉淀去杂质。临床前需要稀释，有可能造成二次污染。为寻找新的抗癌增效、减毒剂，本课题组提取得到肿节风挥发油，通过H22、S180两种荷瘤模型，采用两种给药途径，观察与CTX联合应用对肿瘤的影响。
1 材料
1.1 药物 肿节风药材，浙江国镜药业有限公司；肿节风挥发油（SGE），取肿节风药材经水蒸气蒸馏法提取挥发油，临用前配制成剂量为1.83mg/ml、2.75mg/ml、3.66mg/ml；注射用环磷酰胺：江苏恒瑞医药股份有限公司，批号为06070721；氯化钠注射液：国营张家港制药厂，批号06061503。
1.2 瘤株 小鼠肉瘤S180、小鼠肝癌H22，浙江中医药大学生命科学院提供。
1.3 仪器 Heraeus Biofuge冷冻离心机，德国Heraeus；Power Wave340酶标仪，美国BioTek。
1.4 动物 昆明种小鼠，体重18～22g，雌雄各半，浙江中医药大学动物中心提供，动物许可证号为SCXK（沪）2003-0003。
2. 方法
2.1 两种给药途径对CTX的增效作用实验［2］ 动物分组：昆明种小鼠，体重18～22g，随机分成7组。①SGE iv：模型对照组（NS）、两组单用CTX1、2组（10mg/kg、15mg/kg），另设CTX+SGE1、2组（10mg/kg、15mg/kg）分别加用SGE（18.3mg/kg、36.6mg/kg），每组12只小鼠。模型对照组iv生理盐水，CTX组ip.，SGE给药组iv.，0.1ml/10g，连续12天。②SGE ig：模型对照组（NS）、两组单用CTX组（10mg/kg、20mg/kg），另设CTX+SGE3、4组（10mg/kg、20mg/kg）分别加用SGE（18.3mg/kg、36.6mg/kg），每组12只小鼠。模型对照组ig生理盐水，CTX组ip.，0.1ml/10g，SGE给药组ig.，0.2ml/10g，连续12d。取昆明种小鼠S180/H22细胞腹腔内接种8d的种鼠，无菌条件下吸出1～2ml牛奶状、较粘稠的腹水，先用0.4%苔盼蓝染色，计活细胞率>90%，血球计数板计数癌细胞数，以DHanks稀释调整细胞浓度为1×107个/ml，每只小鼠0.1ml右前肢腋窝皮下接种。于末次给药后的第2天脱处死小鼠，完整剥取瘤块，称重，比较单用CTX治疗组与联用SGE组间抑瘤率的差异，观察SGE的增效作用。
抑瘤率（%）=（对照组平均瘤重－给药组平均瘤重）/对照组平均瘤重×100%。
2.2 SGE对CTX致荷瘤小鼠血细胞下降的影响［3］ 取昆明种小鼠60只，随机分成5组，即正常对照组，模型对照组（CTX），SGE剂量组（18.3mg/kg、27.5mg/kg、36.6mg/kg），每组12只。除正常对照组外，各组动物均ip.60mg/kgCTX，1次/d，连续7d。SGE组按照剂量iv.，0.1ml/10g，于停药后24h自小鼠眼眶静脉取血，EDTAK2抗凝，测白细胞数量、血小板数量、血红蛋白浓度。
2.3 统计学处理 数据采用t检验，以x±s表示。
3 结果
3.1 SGE iv给药与CTX合用对S180荷瘤小鼠增效的影响 表1显示，与模型对照组比较，CTX无论是单用还是与SGE合用，均能明显减小S180荷瘤小鼠的瘤重（P<0.05～0.01）。当CTX（10mg/kg或15mg/kg）分别与SGE（36.6mg/kg）合用，其抑瘤率均较相应剂量的单用CTX升高（P<0.05）。CTX10mg/kg、15mg/kg单用的抑瘤率分别为45.24%、49.74%，联用SGE36.6mg/kg的抑瘤率则分别为68.13%、69.81%，提高抑瘤率为50.60%、40.34%。结果表明肿节风挥发油iv给药与CTX合用对S180荷瘤小鼠具有增效作用。
表1 SGE iv给药与CTX合用对S180荷瘤小鼠增效的影响（略）
与模型对照组比较,*P<0.05,**P<0.01；与CTX组比较：△P<0.05,△△P<0.01
3.2 SGE iv给药与CTX合用对H22荷瘤小鼠增效的影响 表2显示，与模型对照组比较，CTX无论是单用还是与SGE合用，均能明显减小H22荷瘤小鼠的瘤重（P<0.01）。当CTX（10mg/kg或15mg/kg）分别与SGE（36.6mg/kg）合用，其抑瘤率均较相应剂量的单用CTX升高（P<0.05）。CTX10mg/kg、15mg/kg单用的抑瘤率分别为43.80%、40.91%，联用SGE36.6mg/kg的抑瘤率为59.93%、62.04%，提高抑瘤率为36.83%、51.65%。结果表明肿节风挥发油iv给药与CTX合用对H22荷瘤小鼠具有增效作用。 表2 SGE iv给药与CTX合用对H22荷瘤小鼠增效的影响（略）
与模型对照组比较,*P<0.05,**P<0.01；与CTX组比较：△P<0.05,△△P<0.01
3.3 SGE ig给药与CTX合用对S180荷瘤小鼠增效的影响 表3显示，与模型对照组比较，CTX无论是单用还是与SGE合用，均能明显减小S180荷瘤小鼠的瘤重（P<0.05～0.01）。当CTX（10mg/kg或20mg/kg）分别与SGE（73.2mg/kg）合用，其抑瘤率均较相应剂量的单用CTX组有升高趋势。CTX10mg/kg、20mg/kg单用的抑瘤率分别为44.47%和56.33%，联用SGE73.2mg/kg的抑瘤率则分别为57.59%、69.34%，提高抑瘤率为29.50%、23.09%。结果表明肿节风挥发油灌胃给药与CTX合用对S180荷瘤小鼠具有一定增效作用。
表3 SGE ig给药与CTX合用对S180荷瘤小鼠增效的影响（略）
与模型对照组比较,*P<0.05,**P<0.01；与CTX组比较：△P<0.05,△△P<0.01
3.4 SGE ig给药与CTX合用对H22荷瘤小鼠增效的影响 表4显示，与模型对照组比较，CTX无论是单用还是与SGE合用，均能明显减小H22荷瘤小鼠的瘤重（P<0.05～0.01）。当CTX（20mg/kg）与SGE（73.2mg/kg）合用，其抑瘤率较单用CTX明显升高（P<0.05）。CTX10mg/kg、20mg/kg单用的抑瘤率分别为37.80%、45.19%，联用SGE73.2mg/kg的抑瘤率则分别为46.76%、57.48%，提高抑瘤率为23.70%、27.19%。结果表明肿节风挥发油灌胃给药与CTX合用对H22荷瘤小鼠具有一定增效作用。
表4 SGE ig给药与CTX合用对H22荷瘤小鼠增效的影响（略）
与模型对照组比较,*P<0.05,**P<0.01；与CTX组比较：△P<0.05,△△P<0.01
3.5 SGE对CTX致荷瘤小鼠血细胞下降的影响 表5显示，与正常对照组比较，CTX（60mg/kg）组小鼠的WBC、PLT、Hb均显著下降（P<0.01）；与CTX模型组比较，SGE（27.5mg/kg、36.6mg/kg）均能显著增加WBC、PLT数量（P<0.01～0.05）；SGE（18.3mg/kg）能增加PLT数量（P<0.05）。结果表明肿节风挥发油能明显回升化疗药CTX所引起的白细胞、血小板下降，从而降低化疗药的毒性。
表5 SGE对CTX的减毒作用（略）
与模型对照组比较,*P<0.05,**P<0.01；与CTX组比较：△P<0.05,△△P<0.01
4 讨论
据WHO报告，目前全球每年新发的癌症病人约1000万，死亡620万。预计未来25年内将有3亿新病历，有1亿死于肿瘤。肿瘤已经成为人类的主要死亡原因之一。化学治疗虽能直接杀伤肿瘤细胞，抑制肿瘤生长，但也引起许多不良反应，尤其对骨髓造血功能的抑制更为明显，使患者的血液细胞减少［4］。如何提高肿瘤对化疗药物的敏感性并减轻化疗药物的不良反应是目前肿瘤治疗领域中越来越引起人们重视并值得探讨的问题。对化疗中的减毒、增效作用不能孤立的看，而要将两者有机的结合起来使之相辅相成。
《中国药典》2005年版记载：肿节风具有清热凉血，活血消斑，祛风通络等功效。现代药理研究表明肿节风具有抗菌消炎、抑制流感病毒、抗肿瘤、镇痛等多种活性［5］。肿节风抗肿瘤实验研究的文献报道至今已有30年的历史。临床上肿节风主要用于胰腺癌、胃癌、直肠癌、食管癌及急性白血病［67］。本实验采用两种肿瘤模型、两种给药途径，研究肿节风挥发油对CTX治疗肝癌H22、肉瘤S180的增效作用、以及对CTX所致白细胞减少的作用。证明了肿节风挥发油能够提高CTX的抗肿瘤效果，并能拮抗CTX所引起的白细胞总数、血小板数量下降。说明肿节风挥发油能够辅助化疗药物CTX增强抗肿瘤作用，同时减轻CTX的毒性。
【参考文献】
［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典［S］.北京:化学工业出版社，2005:154155.
［2］ 李仪奎.中药药理实验方法学［M］.上海科学技术出版社，2006:777781.
［3］ 赵诗云.肿节风对小鼠白细胞和血小板的影响［J］.上海实验动物科学,2000,20(3):154156.
［4］ 高春义.蜂胶提取物对肿瘤化疗药物减毒作用的实验与临床研究［J］.中国生化药物杂志,2000,21(2):90．
［5］ 孙文娟,李晶,兰凤英,等.肿节风注射液抗小鼠肝癌HepA22的作用及毒理［J］.中成药,2003,25(4):313315. |
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