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作者：边才苗 杨云斌 费杰 何伟平 钟浩
【摘要】 ［目的］研究五味子提取物的抑菌活性，为其合理开发提供参考。［方法］以大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和肺炎克雷伯氏菌为供试菌种，采用滤纸片法和平板二倍稀释法研究了五味子70%乙醇提取液的抑菌作用。［结果］五味子提取物对4种供试菌都有明显的抑制作用。滤纸片法的MIC，金黄色葡萄球菌为62.5mg/ml，大肠埃希氏菌、绿脓杆菌、肺炎克雷伯氏菌为31.3mg/ml；二倍稀释法的结果类似，除金黄色葡萄球菌的MIC为50mg/ml外，其余3种菌均为25mg/ml。另外，五味子提取物经短时间的高温处理，仍具有较强的抑菌作用。［结论］五味子乙醇提取物具有明显的抑菌作用，且其抑菌成分是热稳定的。
【关键词】 五味子 提取物 抑菌作用
五味子［Schisandra chinensis(Turcz.)Baill］别名北五味子、辽五味子、山花椒、乌梅子、软枣子等，为木兰科五味子属植物。多年生落叶木质藤本，以野生为主，为常用中药材。主要以果实入药，因有甘、酸、辛、苦、咸五味而得名，有敛肺、滋肾、止汗、生津、止泻、涩精等功能。可以治疗咳嗽、哮喘、口渴自汗、盗汗、遗精、久泻、神经衰弱等症，也是很好的果酒和饮料的原料［1］，具有极高的药用价值和营养价值，是一种新型的“药食同源”功能性保健食品，其果实在国际上已成为一种新兴食品工业的重要原料［2，3］。本实验采用滤纸片法和二倍稀释法，研究了五味子提取物对4种常见污染菌的抑制作用，为其进一步开发利用提供依据。
1 资料与方法
1.1 菌种与培养基 试验菌为金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、绿脓杆菌和肺炎克雷伯氏菌，由浙江省台州医院微生物实验室友情赠送。牛肉膏蛋白胨培养基按文献［4］自制，PH为6.0（用PBS配制［5］）。
1.2 五味子提取物的制备 五味子饮片购自临海市医药有限公司，经70℃烘干后研成粉末。取粉末10g用75％乙醇在超声波清洗器中提取，反复多次，直至浸出液色淡。将浸出液浓缩，并定容到10ml，即1ml提取液为1g五味子的提取物［6］。提取液过0.22μm滤膜除菌，4℃贮存备用。
1.3 抑菌试验
1.3.1 抑菌效力的测定 将供试菌从斜面转接到5ml液体培养基，30℃培养24h，吸取50μl到5ml液体培养基，30℃培养6h后取100μl菌液均匀涂布到平板上；再贴上滤纸圆片（φ6mm，提取液浸24h后风干），每皿4片，重复3次。37℃倒置培养24h后测定抑菌圈大小，用无菌水作空白对照，确定抑菌效果。
1.3.2 最低抑菌浓度（MIC）的测定 采用二倍稀释法［7］测定提取物对供试菌的MIC。取7支试管，第1支加入10ml提取液，其余6支各加入5ml无菌水，从第1支吸取5ml提取液移至第2支，混匀后，再吸取5ml至第3支，以此类推，最后1支试管取出5ml弃去，每一试管的浓度分别为1000、500、250、125、62.5、31.3和15.6mg/ml。分别将5ml上述各浓度的提取物与20ml牛肉膏固体培养基混匀，制成提取物的浓度分别为200、100、50、25、12.5、6.3和3.2mg/ml（w/v）的平板，接种菌液后倒置培养24h观察，以没有供试菌生长的最低浓度为提取物的MIC。
1.3.3 热稳定性试验 将五味子提取液置于80℃水浴、100℃水浴和121℃湿热条件下［8］热处理20min，再制成浓度为500mg/ml的提取液浸泡滤纸片，稍风干后贴在涂有菌液的平板中，测定其抑菌效果。 2 结果与分析
2.1 提取物浓度对抑菌效力的影响 滤纸片法测定结果（见表1）显示，五味子提取物对4种供试菌的生长均有很强的抑制作用，其中对绿脓杆菌的抑制作用最强，肺炎克雷伯氏菌其次，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌最弱。
表1 五味子提取物的浓度对抑菌效率的影响（略）
2.2 不同菌的MIC 提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、肺炎克雷伯氏菌的MIC值如表2所示。除金黄色葡萄球菌的MIC为50mg/ml外，其余3种菌均为25mg/ml（与滤纸片法基本一致）。
表2 五味子提取物的MIC（mg/ml）（略）
“－”表示无菌生长，“+”表示细菌生长
2.3 提取物的热稳定性试验 提取物经3种温度的热处理20min后，仍具有较强的抑菌效力，其抑菌圈直径与未经高温处理的样品接近，其中只有对绿脓杆菌抑制作用，经100℃处理和湿热灭菌后有显著下降，对金黄色葡萄球菌的抑制作用，经湿热灭菌后有显著降低；而对大肠杆菌和肺炎克雷伯氏菌抑制作用，3种处理与对照均无显著差异（见表3）。说明五味子的抑菌成分具有一定的热稳定性。
表3 热处理对五味子提取物抑菌效力的影响（略）
不同字母表示P＜0.05水平显著，ns为不显著
3 结论
经反复实验，结果表明五味子提取物的浓度在31.3～1000mg/ml范围内，对4种供试菌的抑制效应依次为：绿脓杆菌>肺炎克雷伯氏菌>大肠杆菌>金黄色葡萄球菌。滤纸片琼脂扩散法结果显示，除金黄色葡萄球菌MIC为62.5mg/ml外，其余3种供试菌MIC均为31.3mg/ml；采用二倍稀释法测得的MIC也显示类似的结果，金黄色葡萄球菌的MIC为50mg/ml，另3种菌的MIC均为25mg/ml。另外，五味子提取物经短时高温处理后，其活性成分不变，仍保持较强的抑菌效果。
【参考文献】
［1］ 樊骏，张亚雯.五味子规模化栽培管理技术［J］.陕西林业科技，2005，(3)：8385.
［2］ 王森.五味子研究概况及其发展前景［J］.经济林研究，2003，(4)：8587.
［3］ 王森.栽培五味子有前途［J］.农家参谋，2002，(1)：35.
［4］ 黄秀梨.微生物实验指导［M］.北京：高等教育出版社，1997：35115.
［5］ 张志良，瞿伟菁.植物生理学实验指导［M］.北京：高等教育出版社，2004：307.
［6］ 李钧敏，虞优优，金则新.大血藤叶片提取物抑菌作用的初步研究［J］.浙江中医学院学报，2004，28(1)：5557.
［7］ 郑钧镛.药物微生物及检验技术［M］.北京：人民卫生出版社，1985：351352.
［8］ 严赞开.生姜提取物的抑菌试验［J］.中国食品添加剂，2005，(1)：7476. |
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