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作者：汪克明 王月兰 刘婧 吴子建 李晓民
【摘要】 ［目的］观察心肌细胞内尾加压素Ⅱ在电针“内关”和“神门”预处理对急性心肌缺血再灌注大鼠保护中的作用。［方法］选健康雄性成年SD大鼠80只随机分为正常组、模型组、电针预处理组和尾加压素Ⅱ特异性拮抗剂组。同等条件下喂养，在模型复制前3d予以电针“内关”和“神门”、以及尾静脉注射尾加压素Ⅱ特异性拮抗剂；采用左冠状动脉前降支穿线法复制急性心肌缺血再灌注模型，心电图监视。选取模型复制成功大鼠10只纳入统计。［结果］模型组大鼠缺血再灌注心肌细胞内尾加压素Ⅱ含量较正常组明显减少，电针“内关”和“神门”预处理组虽也显著下降，但较模型组少（P<0.01）；而特异性拮抗剂组则与模型组没有显著差异（P>0.05）。［结论］电针“内关”、“神门”预处理可以有效抵抗急性心肌缺血再灌注损伤，尾加压素Ⅱ在此效果中具有重要作用。
【关键词】 心肌缺血 再灌注损伤 电针 内关 神门 尾加压素
本实验观察了电针“内关”、“神门”对心肌缺血再灌注大鼠缺血心肌细胞内尾加压素Ⅱ含量的影响，为进一步探讨针刺预处理的心肌保护和针刺“治未病”理论提供实验依据。
1 材料和方法
1.1 实验动物及分组 同等条件下饲养健康成年雄性SD大鼠80只，体质量（220±20）g(安徽全椒实验动物有限公司提供，合格证号：(99)量认（苏）字(Z0582)号)。随机分为4组，分别为正常对照组、I/R模型组、针刺预处理组、UII特异性受体拮抗剂组，每组20只。
1.2 试剂和仪器 UII检测试剂盒（UNIONHONEST#ADL，批号：110D2356）；BIOPAC十六导生理纪录仪（美国加州产，11A2055系列）；全自动生化分析仪（丹麦DAKO公司）；PCE－A型程控电针治疗仪（安徽天恒科技实业有限公司）；DY89Ⅱ型电动玻璃匀浆机（宁波新芝生物科技有限公司）；TGL16高速离心机（江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司）
1.3 实验条件 动物于安静的环境下分笼饲养，室温控制在22±1℃（空调）的范围内，相对湿度60%左右，自然光照，塑料笼内以消毒木屑为垫料，食水自取。
1.4 模型处理方法 正常对照组同等条件下饲养，不做其它任何处理；模型对照组同等条件下饲养，3天后直接造模，不做其他处理；针刺预处理组和拮抗剂组每天电针1次，连续3d。第3天针刺结束后即刻造模。
1.5 急性心肌缺血模型复制和评定 模型复制前先记录正常时心电图，心电图异常者淘汰不用，心电图记录采用针形电极插入大鼠四肢皮下，常规连接Biopac多道生理记录仪，记录标准Ⅱ导联ECG。
大鼠用乙醚麻醉后，固定，沿胸骨左缘剪开皮肤，用止血钳游离大鼠左侧的胸大肌，暴露左第3、4肋，可以清晰的看到心脏的暗影，用弯头止血钳沿胸骨左缘3、4肋间穿透胸膜，挤出心脏，用4/0医用缝合线在冠状动脉左前降支挂线，然后迅速将心脏送回胸腔，医用缝合线的两端留置体外备用。用长嘴止血钳把胸部皮肤和肌肉以及心脏挂线夹紧，防止气胸，观察心电图变化，T波高耸或者倒置为心肌缺血标志，如心电图改变不明显，则稍稍松一点止血钳，拉紧一端线头，这时则可以明显的看到心电图改变，30min后，再灌注时，松开止血钳，形成再灌注损伤模型。从开胸到关闭胸腔，控制在1min以内完成。根据模型复制前后心电图变化情况初步判断、评价心肌缺血大鼠模型复制成功与否。
1.6 穴位及电针参数选择 “神门”“内关”穴位的定位参照《大鼠穴位图谱的研制》［1］。根据以往的实验研究结果，参考《实验针灸学》每天定时将电针组和拮抗剂组大鼠放入固定器中，选取“神门”，“内关”穴，酒精消毒所取穴位，0.5寸毫针，直刺1mm，接通电针仪，给与电针刺激，刺激参数为：刺激电压5V，电流强度1～2mA，频率为2Hz，波宽300μm，正负向交替方波刺激，每次30min，1次/d，电针3d。第三天针刺后进行造模，约距第一次针刺时间48～50h。
1.7 标本取材及检测 模型复制成功后24h，10％水合氯醛（0.36ml/100g体质量）腹腔注射麻醉大鼠，腹主动脉真空管采血，离心，选取上层血浆，即刻标记放入液氮冷藏保存；同时取大鼠左心室心尖部缺血区心肌组织，称重，按照1∶9的比例加入生理盐水，匀浆，离心，选取上清液，治成10%的组织溶液，标记放入液氮冷藏保存待测。严格按照试剂盒操作规范，用ELASE方法测量心肌组织液中的UП含量。
1.8 统计学处理 实验数据采用均数±标准差（x+s）表示，各组间均数比较采用单因素方差分析（Oneway ANOVA），组间均数的两两比较采用q检验(NewmanKeuls test)法，P<0.05有统计学意义。数据的处理采用SPASS for windows11.0软件分析。 2 实验结果
2.1 心电图变化 取材前心电图比较结果显示：正常组大鼠心电图完全正常；模型组出现明显心肌缺血的表现；电针组和拮抗剂组大鼠的心电图比模型组均有所改善。见图1。
图1 各组心电图变化（略）
2.2 针刺抗I/R模型大鼠缺血区心肌组织UII含量的影响,见表1、图2。
表1 针刺抗I/R模型大鼠缺血区心肌组织UII含量的影响（略）
与模型组比较，*P<0.05；**P<0.01；与针刺组比较，▲P<0.01；与SB710411组比较，&P<0.01
图2 针刺抗I/R模型大鼠缺血区心肌组织UII含量的影响 （略）
由表1和图2可以看出，缺血再灌注区心肌细胞UII含量在复制模型后明显减少（P<0.01）；电针“内关”和“神门”干预组的UII含量虽然也有明显的下降（P<0.05），但较模型组较少（P<0.01）；而采用UII特异性拮抗剂SB710411组大鼠虽然也接受了电针预处理，缺血再灌注区心肌细胞UII的含量与模型组没有显著差异，而与单纯电针组具有明显差异（P<0.01）。
3 讨论
尾加压素Ⅱ(urotensinⅡ，UⅡ)是一种生长抑素样环肽，与特异性受体GPR14共存与心血管系统中，具有较为复杂的心血管生物学效应。UII广泛分布在冠状动脉的内皮细胞、泡沫细胞、炎症细胞以及迁移增生的平滑肌细胞中，是重要的心血管介质，具有强有力的缩血管作用，其作用较内皮素更强。
“内关”穴为手厥阴心包经的络穴，也是八脉交会穴之一，通阴维脉，是治疗心胸疾病的要穴，素有“内关主刺气快攻，兼灸心胸胁痛疼”的古训，也是现代临床常用的穴位之一。“神门”为手少阴心经的原穴，是心原气留止的部位，《灵枢·九针十二原》说：“五脏有疾，当取之十二原。”说明了脏腑发生病变，应当选择相应经脉的原穴进行治疗。既往的临床和实验研究也证实了“内关”穴和“神门”穴均可以改善心肌缺血大鼠心功能、交感神经放电，可以有效防治心肌缺血引发的多种心脏疾病。
本实验通过观察受心肌缺血再灌注损伤大鼠缺血心肌内尾加压素Ⅱ含量的变化，研究针刺“内关”和“神门”预处理对心肌缺血再灌注损伤的影响，探讨针刺“内关”和“神门”预处理的作用机制。研究发现，心肌缺血再灌注模型复制后，心肌细胞内UII的含量明显降低，说明了UII对心肌缺血再灌注损伤具有较强的敏感性。电针“内关”和“神门”预处理组虽然也有下降，但显然没有模型组下降的明显，与模型组比较具有统计学意义，说明电针“内关”和“神门”可以显著影响UII在心肌细胞内的表达。而使用了UII特异性拮抗剂以后，可以发现，UII在心肌细胞中的含量与模型组的没有统计学差异，进一步论证了电针“内关”和“神门”的作用。本研究一方面证实了模型复制的成功性，同时也体现了针刺预处理可以显著提高UII在缺血再灌注损伤心肌细胞内的水平，具有较强的心肌保护作用。
【参考文献】
［1］ 华兴邦，李辞蓉，周浩良，等.大鼠穴位图谱的研制［M］.北京：人民卫生出版社，1991：3438. |
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