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【摘要】 ［目的］ 建立溃疡性结肠炎（UC）大鼠模型, 研究芪倍合剂对大鼠溃疡性结肠炎（UC）的治疗作用及对肿瘤坏死因子α(TN Fα)、白细胞介素8（IL8) 产生和表达的影响。［方法］用三硝基苯磺酸(TNBS) 法制备大鼠UC模型,采用酶联免疫吸附(EL ISA) 方法测定大鼠血清中 TNFα、IL8水平。［结果］芪倍合剂组和柳氮磺胺吡啶组TNF α、IL 8明显低于模型组,有统计学意义（P<0.01 ）。［结论］ 芪倍合剂可显著降低UC大鼠血清TNF α、IL 8 的水平,有治疗UC 的前景。
【关键词】 溃疡性结肠炎 芪倍合剂 肿瘤坏死因子 α 白细胞介素 8
溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是一种反复发作的的肠道慢性非特异性炎症和溃疡性病变。其病因和发病机制至今尚未明确, 国内外研究多集中于感染、免疫、遗传等因素, 其发病与免疫功能紊乱有关已得到普遍认可,而具有免疫调节作用的细胞因子(cytokines,CK) 在UC 的发病过程中起重要作用,白细胞介素8（IL8)和肿瘤坏死因子α（TNFα）等促炎症细胞因子已是公认的能介导UC 发病的细胞因子,通过不同途径参与肠黏膜炎症形成的起始阶段和发展过程,是介导UC 发病的关键因素之一［1］。笔者在临床上应用芪倍合剂治疗UC 取得了良好的效果。而以芪倍合剂治疗UC 的实验性研究尚未见报道,因此,笔者通过观察芪倍合剂对溃疡性结肠炎大鼠模型血清IL8、TNFα的影响,以探讨该方治疗UC 的作用机制。
1 材料与方法
1.1 材料 实验动物：健康SD大鼠40只, 体重200～220 g 雌雄各半，由新乡医学院动物中心提供。药物：芪倍合剂为我院根据张仲景之大黄附子汤加味研制的一种灌肠剂,由黄芪、大黄、五倍子、白及等 8味中药组成（批号070824）。柳氮磺胺吡啶（SASP),上海信谊嘉华药业有限公司,（批号061204)。试剂与仪器：2、4、6 三硝基苯磺酸(TNBS, sigma 公司); 无水乙醇(分析纯,北京化工厂)。TNFα试剂盒（北京科美东雅生物技术有限公司), IL8试剂盒（北京科美东雅生物技术有限公司）。LD4 2A 高速离心机，2550 型酶联免疫检测仪，724 微机型可见分光光度计,840 型高效液相色谱仪。
1.2 方法
1.2.1 大鼠TNBS 性结肠炎模型的制备 适应性喂养1 周,按完全随机设计法将 40只大鼠分为 4 组,每组 10 只,分别为正常组、模型对照组、SASP 组和芪倍合剂组。除正常组外，参照文献［2］法造模: 将大鼠禁食24 h 后, 以10% 水合氯醛腹腔注射麻醉（300 mg/kg), 一次性将TNBS（100 mg/kg) 和0.25 ml 的50% 乙醇溶液用橡胶输液管(外径2 mm） 缓慢注入距大鼠肛门约8 cm 处的结肠肠腔内。
1.2.2 给药 造模后第3 d, 各组开始给药,连续4周。芪倍合剂组按2 ml/(100g·d)-1灌肠。SASP组按0.04 g/(100 g·d)-1 灌肠,正常组和模型组以等体积0.85氯化钠灌肠。
1.2.3 观察指标与测定方法 4周后,各组大鼠经 10 %水合氯醛(400 mg/ kg) 麻醉,颈动脉取血,待测血清分别供 IL8 和TN Fα测定。检测程序严格按试剂盒使用说明进行, 采用双抗体夹心法检测大鼠结肠组织IL8 和TN Fα值。
1.3 统计学处理用SPSS 10.0 软件进行, 数据均采用t检验、方差分析q检验。
2 结果
2.1 各组病理改变 正常组大鼠结肠黏膜上皮完整、连续,腺体排列规则、结构清楚,无溃疡、无糜烂点及淋巴细胞浸润。模型组大鼠结肠黏膜可见多个溃疡出现,糜烂点散在多个分布,黏膜淋巴细胞浸润严重,杯状细胞减少明显。SASP治疗组与芪倍合剂组在溃疡数、糜烂点个数均较模型组明显减少,同时炎症细胞浸润和杯状细胞减少程度也减轻。
2.2 各组大鼠血清 TNFα、IL – 8水平比较结果见表1。
表1 各组大鼠血清 TNFα、IL 8 水平比较（略）
与正常组比较, 1）P<0.01与模型组比较,2）P<0.01 3 讨论
芪倍合剂为该院根据张仲景之大黄附子汤加味研制的一种灌肠剂，由黄芪、大黄、五倍子、白及等8味中药组成,具有健脾益肾、涩肠止泻之功效,用于治疗直肠炎及慢性UC［3］。UC是一类病因尚未完全明确的疾病。它的病因和发病机制与免疫功能紊乱有密切的联系［4］。促炎细胞因子IL8、TNFα上调, 可诱导和促进炎症发生, 在UC 的形成中起重要作用, 而且这些细胞因子的表达和分泌量均与UC 疾病的炎症程度呈正相关［5］。TNFα 是一种主要由活化的单核- 巨噬细胞所产生的具有多种生物活性的细胞因子,可使白细胞在炎症局部聚集,刺激单核细胞、血管内皮细胞等产生细胞因子,诱导细胞因子合成并产生级联反应,最终导致组织的炎症损伤。邹莉波等［6］检测TNBS结肠炎模型大鼠血清TNFα水平均显著高于正常对照组,且与疾病严重程度成正相关。临床研究［7］也证实UC活动期患者血清TNFα水平明显比已治愈和正常人血清TNFα水平升高,已治愈者血清TNFα水平明显降低并与正常对照组相比统计学意义,TNFα升高水平与病情的轻重和病变范围有关。IL8是由单核细胞、巨噬细胞、血管内皮细胞和T细胞等多种细胞产生的一种多肽因子。其作用主要是趋化和激活嗜中性粒细胞,并参与嗜中性粒细胞与内皮细胞黏附过程的调节［8］。IL8 是UC发生过程中重要的炎症递质,UC患者的血清IL8水平均明显增高［9］。笔者研究显示, 模型组大鼠血清中TNFα、IL8水平与正常对照组比较明显增高,有统计学意义(P<0.01);芪倍合剂或SASP组与模型组比较,均能显著降低大鼠血清中IL8、TNFα水平（P<0.01)。各组IL8、TNFα在血清中表达的增强程度与UC病理上严重程度相平行，模型组TNFα、IL8水平明显增加, 说明TNFα、IL8 在实验性UC的发生、发展过程中可能起重要作用。芪倍合剂能显著降低大鼠模型结肠组织促炎细胞因子TNFα、IL8水平, 表明其能抑制促炎细胞因子的分泌, 调节免疫反应, 减少炎症递质的释放, 从而有效阻断免疫反应性对机体造成的损伤, 达到治疗的目的。实验结果表明，芪倍合剂与SASP组在各项检测指标的比较中大体相当，这为临床上应用芪倍合剂治疗UC提供了理论和实验依据。
【参考文献】
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［6］ 邹莉波.复方青黛颗粒治疗溃疡性结肠炎的机制［J］.沈阳医科大学报,2006,23(2)：119122.
［7］ 陈垦,梁坚,周宇. 溃疡性结肠炎病人血清 SILIR 和 TNFα水平的变化及意义探讨［J］. 中国肛肠病杂志,1999,19(7)∶911.
［8］ 张文俊，龚燕芳，许国铭，等.血清白细胞介素8与溃疡性结肠炎的关系［J］.胃肠病学，2002，7（5）：277279.
［9］ 口锁堂，吴焕淦，施达仁.白介素与溃疡性结肠炎［J］.世界华人消化杂志,2006,14(4): 405411. |
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