1.2  方法  行层次解剖取大鼠坐骨神经，按常规冰冻切片方法，连续切片6张，厚度10μm，分别置于3种固定液中4℃冰箱内固定2分钟，然后入苏木精染液放置5分钟，水洗，再经盐酸酒精分化、氨水返蓝、伊红染液、酒精脱水、二甲苯透明后，用中性树胶封片。

　　2  结果
   
　　三种固定液的染色效果各有差异，其中丙酮的固定效果最好，组织结构清晰，核着色清楚，核浆对比度好，组织没有发生皱缩，见图1；10%甲醛溶液固定的组织染色效果差，核着色不良，结构模糊，轴突、神经膜等结构不清楚，组织稍有皱缩，见图2；Bouin液固定的组织染色效果较差，组织结构尚可，细胞核、轴突和神经膜清晰可见，但是组织皱缩明显，见图3。

　　图1  丙酮固定：组织结构清晰，核着色清楚，核浆对比度好，组织没有发生皱缩（HE染色，10×40）（略）

　　图2  10%甲醛固定：核着色不良，结构模糊，轴突、神经膜等结构不清，结构稍有皱缩（HE染色，10×40）（略）

　　图3  Bouin液固定：组织结构尚可，细胞核、轴突和神经清晰可见，但是组织皱缩明显。（HE染色，10×40）（略）

　　3  讨论
   
　　固定的作用在于使蛋白变性、凝固、沉淀，保持细胞、组织原有的形态结构。对于不同的组织需选择不同的固定剂，以期达到最佳效果。甲醛、丙酮、苦味酸对组织均有固定作用，甲醛对组织无明显收缩和膨胀作用,经其短期固定的标本,核染色甚佳，但它不能抵消因冷冻所引起的细胞内液体的肿胀，所以一般来说甲醛固定的组织结构尚完好, 但核发生肿胀、模糊。但本实验并未发现神经细胞核肿胀，估计与不同组织的差异有关；苦味酸对组织的收缩作用显著，这与本实验的结果相同；丙酮为沉淀类固定剂，对组织穿透性强。本实验结果证实丙酮对神经纤维的固定效果是最好的。但也有报道认为混合固定液对冷冻切片HE染色的效果优于单纯固定液[5]。总之，做一张好的冰冻切片需要丰富的经验和高超的技术

上一页  [1] [2] [3] [4] 下一页