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百合知母汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞的保护作用           
百合知母汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞的保护作用
7℃、体积分数5%CO2培养箱内培养,预培养72 h后,换液并加入最适浓度的CdCl2刺激液,依据含药血清浓度由低至高分为5组,使其终浓度为体积分数125%、25%、5%、10%、20%。另设对照组:①空白对照组:体积分数10%DMEM培养液。②模型组:体积分数10%DMEM培养液+最适浓度 CdCl2刺激液。③空白血清组:空白血清+最适浓度 CdCl2刺激液。继续培养48h后,采用MTT比色法测定D值,观察含药血清对CdCl2刺激液致GC损伤的影响。

  18统计学方法采用微软Excel软件进行数据的分析。

  2结果

  21卵巢GC最适生长时间的确定图1结果显示,23 d幼年期大鼠卵巢GC数量多、形态好,在培养3~8 d内呈指数生长,为最适的生长时间。3月龄成年期大鼠卵巢GC数量和形态都不如幼年期大鼠的GC,且其指数生长期较短。12月龄老年期大鼠卵巢GC数量较少,活性低,培养5 d后已基本无细胞增殖。因此,本实验选择幼年期大鼠卵巢GC进行药物的筛选,并且选择在培养第3天时介入干扰因素,第4天测定细胞活性。

  22CdCl2刺激液最适浓度的确定相差显微镜下观察到20 μmol/L以上浓度的CdCl2对GC有损伤作用。40 μmol/L CdCl2培养的GC细胞边缘出现皱缩,少量细胞悬浮于培养液中。60、80 μmol/L CdCl2培养的GC中多数细胞边缘出现皱缩,并有大量细胞脱壁死亡。表1结果显示,随CdCl2浓度的增加,D值降低,提示其呈剂量依赖性关系,随浓度增加而损伤加重。因此,我们选择40 μmol/L CdCl2作为最适的刺激浓度。表1不同浓度CdCl2对颗粒细胞增殖的影响

  23百合知母汤含药血清对大鼠卵巢GC的影响表2结果显示,空白血清组和空白对照组比较差异有显著性意义(P<001),说明大鼠血清对卵巢GC生长有促进作用。各含药血清组GC数目都有所提高,其中体积分数5%、10%含药血清组GC数目显著增多,与空白血清组比较差异有显著性意义(P<005),说明百合知母汤可能有促进卵巢GC增殖的作用。表2百合知母汤含药血清对大鼠卵巢GC的影响统计方法:t检验;①P<001,与空白对照组比较;

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