| 一种人硫氧还蛋白基因修饰肝细胞的制备 |
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s cloned and assembled with recombinant retrovirus， then eukaryotic cells infected by this virus were capable of expressing bioactive hTrx in the form of fusion proteins. Immunohistochemistry demonstrated normal function of the hTrx gene-modified hepatocytes， which possessed strong antioxidative capacity as shown by MTT assay and could be proliferated effectively. 【Conclusion】 The hTrx gene-modified hepatocyte with more stronger antioxidative capacity is prepared.
人硫氧还蛋白(human thioredoxin， hTrx)是目前已知Trx中活性最好的蛋白，由TrX构成的氧化还原系统广泛存在于组织细胞中，具有清除自由基和维持体内稳定的氧化还原状态的重要作用，对缺血再灌注损伤有明确的保护作用。Trx也可通过对转录因子如NF-κB等的调节作用，促进细胞的增殖及抑制细胞的凋亡等[1-2]。研究发现Trx对肝细胞生存生长具有明显的促进作用[3]，同时其抗氧化和凋亡抑制作用，因此可在肝细胞移植和生物人工肝细胞保存方面发挥重要作用。但能否持久地促进肝细胞的增殖，减少凋亡和氧化应激成为Trx应用的关键。本实验成功进行了hTrx基因修饰肝细胞的制备，修饰后的肝细胞表现出较强的抗氧化应激能力，可缓解细胞损伤等。
1 材料和方法
1.1 hTrx cDNA基因克隆
根据GenBank中hTrx cDNA 序列(J04026)设计引物，引入BglⅡ、BamHⅠ酶切位点，并加入对框序列TT(不含终止子TAA)。引物：正向5′- GCAGATCTATGGTGAAGCAGATCGAGAG-3′，反向5′-GCGGATCC 上一页 [1] [2] [3] [4] 下一页 |
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