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将58只造模成功的大鼠编号，通过PEMS 31软件“完全随机(两组及多组)设计”程序产生随机数字，按3组1∶1∶1的比例随机分为模型组、巴氯酚组与舒筋颗粒组。模型组灌服蒸馏水2 mL，巴氯酚组按计算所得药量以135 mg·kg-1·d-1剂量灌服，舒筋颗粒组以675 g·kg-1·d-1剂量灌服，均每天1次，连续给药12 d。
17观察指标及检测方法
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171肌张力改善情况按治疗前及治疗后3、6、9、12 d比较各组不同时间点肌张力改善级数差值。
172GABA检测方法采用光镜下观察和平均光密度分析(Mean)法。腹腔内注射10 mg/L的水合氯醛麻醉后开胸，沿剑突下剪开皮肤肌肉，暴露心脏;经左心室通过升主动脉直达主动脉弓处，剪开左心耳，快速滴注生理盐水至大鼠手足尾巴变白，继而快速输入40 g/L的多聚甲醛磷酸盐缓冲液(PBS)250 mL(4℃)，直至动物肌肉震颤、全身呈完全僵硬状态;原位静置1 h后，剪开背部皮肤肌肉，暴露脊柱;用咬骨钳钳去脊椎骨，暴露脊髓，将颈膨大部位脊髓取出，放入40 g/L的多聚甲醛磷酸缓冲液(含01 mol/L PBS)中进行后固定4 h，然后浸入300 g/L蔗糖磷酸缓冲液(pH 74，4℃)过夜，直至组织下沉，再放入PBS(pH 74)液中，0℃~4℃冰箱中备用。按免疫细胞化学法染色，用PBS替代一抗作阴性对照;用已知的阳性片作为阳性对照。
18统计学处理采用SPSS 110统计软件建立数据库并进行数据录入和分析。 2结果
21各组大鼠治疗前后肌张力比较表1结果显示，治疗后3 d、6 d各组大鼠肌张力与治疗前改善级数的差值比较，差异无显著性意义(P>005)。治疗后9 d、12 d舒筋颗粒组、巴氯酚组与模型组比较差异均有显著性意义(P<005或P<001)，舒筋颗粒组与巴氯酚组比较差异无显著性意义(P>005)。
22各组GABA表达结果比较光镜下观察各组大鼠脊髓组织中GABA的表达，模型组脊髓背角的第Ⅰ、Ⅱ层密集分布着深棕色细点状颗粒，对称排列，阳性反应面积加宽，颜色加深，在脊髓背角的其他层面为比较均匀的浅黄色。舒筋颗粒组及巴氯酚组GABA表达相对减弱，阳性反应面积变小，颜色稍变淡。结果见图1。表1各组治疗后不同时间点肌张力与治疗前改善级数差值比较
23各组大鼠GABA平均光密度比较表2结果显示，各组大鼠GABA平均光密度舒筋颗粒组、巴氯酚组与模型组比较差异有显著性意义(P<005)，巴氯酚组与舒筋颗粒组比较差异无显著性意义(P>005)。 表2各组大鼠GABA平均光密度比较
3讨论
脑血管意外所导致的肢体痉挛已成为医学的焦点，其中抑制性神经递质学说成为本病研究的热点，GABA作为中枢神经系统内最重要的抑制性神经递质普遍受到关注。已有研究表明[6]GABAB受体主要分布在突触前神经终末，在突触前抑制其他兴奋性递质的释放而产生抑制效应，位于突触后膜的GABAB则通过G蛋白的介导，开启K+通道使之外流，产生慢的抑制性突触后电位(IPSP)及较弱的突触后抑制而对运动进行抑制性调控，导致肌张力的增高。目前临床所用巴氯酚等降低肌张力的药物几乎都是以其受体为作用靶点。
黄培新教授认为本病主要为肝肾阴虚、筋脉失养，临证当以“养阴柔筋”为法，取《伤寒论》“伤寒脉浮，微恶寒，脚挛急……，更作芍药甘草汤与之，其脚即伸”、“胫尚微拘急，重与芍药甘草汤，尔乃胫伸”之宗义，在《伤寒论》芍药甘草汤基础上加用舒筋活络的木瓜而成舒筋颗粒。方中白芍为君，入肝脾经，具柔肝缓急、养血敛阴之功;炙甘草味甘，归心脾肺胃经，能补脾益气、缓急止痉;木瓜酸温，归肝脾经，有舒筋活络之用。诸药合用，奏滋养肝血、柔肝舒筋之效。前期临床研究[7]表明本方对改善脑卒中后患者肢体的痉挛状态、缓解患肢疼痛具有肯定的作用。
本实验结果提示：治疗后9 d、12 d肌张力与治疗前改善级数的差值比较，舒筋颗粒组优于模型组(P<005或P<001)，而舒筋颗粒组与巴氯酚组无显著性差异(P>005);与模型组比较，舒筋颗粒与巴氯酚均能不同程度降低肌张力增高大鼠脊髓后角GABA表达，但两者并无显著性差异。我们推测可能是通过影响GABA的表 上一页 [1] [2] [3] 下一页 |
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