2.1.2  标准曲线的制备  准确称取0.005 0 g葡萄糖标准，以蒸馏水溶解定容至100 ml，得到50 μg/ml的葡萄糖标准溶液。分别吸取0.1 ml、0.2 ml、  0.3 ml、  0.4 ml、  0.5 ml、  0.6 ml葡萄糖标准液并以蒸馏水补足2 ml，各加入1 ml 5%苯酚水溶液，摇匀后，分别加入5 ml浓硫酸，混合均匀并于室温放置20 m

    图1  葡萄糖标准曲线

    Fig.1  Standard curve of glucose

    2.1.3  白术茯苓汤总多糖的提取与精制  取白术、茯苓按临床配比混合均匀后, 精密称取样品粉末5 g置提取装置中，先以石油醚(60 ℃～90 ℃)回流除去脂类(1 h)， 加入90%的乙醇200 ml，在85 ℃下回流,浸提2次，每次2.0 h，目的是除去北沙参中的单糖、低聚糖、苷类等醇溶性成分［5］。药渣挥去溶剂后,用水提取多糖, 提取液在50 ℃经减压浓缩至原体积的1/3, 浓缩后水溶液中加入4倍量的95%乙醇, 静置过夜，抽滤， 沉淀，依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤多次，60 ℃烘干至恒重, 即得白术茯苓汤总多糖。

    2.2  多糖的提取方法

    2.2.1  单因素实验

    2.2.1.1  料液比的选择  称取白术、茯苓按临床配比（1∶1）0.500 g经石油醚回流处理的药材15份，分别按1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50的料液比加入水，于水浴90 ℃提取50 min，过滤，定容至100 ml，备测。

    2.2.1.2  提取时间的选择  称取白术、茯苓按临床配比（1∶1）0.500 g经石油醚回流处理的药材15份，加入20 ml水，于水浴90℃分别提取1 h、2 h、3 h、4 h、5 h，过滤、定容至100 ml，备测。

    2.2.1.3  提取温度的选择  称取白术、茯苓按临床配比（1∶1）0.500 g经石油醚回流处理的药材15份，加入20 ml水，分别在60 ℃、70 ℃、80 ℃、90℃、100 ℃提取30 min，过滤、定容至100 ml，备测。

    2.2.2  白术茯苓汤总多糖提取的最佳组合的选择以1: 30 为料液比, 根据药材性质，拟定影响浸出效果的3 个主要因素A(水浴温度)、B(提取时间)、C(提取次数)为优选因素，每个因素3 个水平选用L9 (34 )正交表进行实验(见表1) ，进一步探索最佳提取参数。表1  因素水平表

    3  结果

    3.1  料液比对白术茯苓汤总多糖含量的影响

    由图2可看出,料液比在1∶10～1∶50之间,从1∶10～1∶30多糖含量随料液比的增加而增加,料液比为1∶30时含量最高,而当料液比为1∶40～1 ∶50 时,提取的多糖含量随料液比的增大趋于稳定。

    3.2  提取时间对白术茯苓汤总多糖含量的影响

    由图3可看出,提取时间在2 h以内,多糖含量随着

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