| APE1在卵巢上皮性癌中的表达及其临床意义 |
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作者：张颖，王东，辛晓燕，王建，向德兵，杨宇馨
【摘要】 目的： 探讨脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶（APE1）基因在卵巢上皮性癌中表达的相关性及其意义. 方法： 应用免疫组织化学检测10例正常卵巢、20例卵巢良性肿瘤、15例卵巢交界性肿瘤和120例卵巢上皮性癌组织中APE1的表达，并分析其与临床病理因素之间的关系. 结果： 卵巢癌组织中APE1呈胞核表达、单纯胞质表达或核质共同表达，胞质异位表达率（57.5%）明显高于正常卵巢组织和良性卵巢肿瘤. APE1胞质表达与卵巢癌病理类型、肿瘤分化程度和FIGO分期有关（P<0.05）. APE1胞核表达的化疗有效率为77.4%，高于APE1胞质异位表达53.8%，APE1胞核表达的卵巢癌患者预后要优于APE1胞质异位表达的卵巢癌患者（P<0.05）. 结论： APE1表达在卵巢癌的发生发展中发挥重要作用，APE1的亚细胞定位对卵巢癌化疗的疗效和预后有一定临床应用前景.
【关键词】 卵巢肿瘤；脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶；DNA损伤；免疫组织化学
0引言
卵巢癌是较常见的女性生殖系统肿瘤，恶性程度高，近年来其发生率在国内外呈上升趋势. 寻找敏感性高、特异性强的肿瘤标记物是卵巢癌诊治中急待解决的问题. 脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1(apurinic/apyrimidinic endonuclase，APE1)，是DNA碱基切除修复途径的关键酶，主要负责DNA损伤中最常见的脱嘌呤/脱嘧啶(apurinic/apyrimidinic，AP)位点［1］. 有研究［2-3］报道，APE1在多种肿瘤组织中高表达，但APE1在卵巢癌组织中的表达还少见报道. 我们采用免疫组织化学技术检测原发性卵巢癌手术标本中APE1的表达特点，旨在从临床病理角度探讨APE1在卵巢癌发生发展中的作用.
1对象和方法
1.1对象选择第四军医大学西京医院和第三军医大学大坪医院199801/200701经手术确诊的卵巢上皮癌初治患者120例，年龄19～81（平均47.2）岁，其中浆液性囊腺癌54例，粘液性囊腺癌35例，子宫内膜样癌7例，未分化腺癌24例. 细胞学分级：高分化癌19例，中分化癌68例，低分化癌33例. 按国际妇产科联盟（FIGO)2003年手术病理分期标准进行分级，其中I期23例，Ⅱ期11例，Ⅲ期73例，Ⅳ期13例. 另取良性卵巢肿瘤20（浆液性囊腺瘤10，粘液性囊腺瘤10）例，年龄23～67（平均43.6）岁，交界性肿瘤15例，21~62（平均38.7）岁和正常卵巢组织10例，年龄38～63（平均46.4）岁作为对照. 所有标本均经40 g/L甲醛固定，常规石蜡包埋，HE染色后再次复核诊断. 浓缩型APE1兔抗人mAb，工作浓度为1∶5000（美国Novus Biologicals公司）；SP免疫组化试剂盒和DAB显色试剂盒（北京中杉金桥生物技术公司）；Imagepro Plus5.1图像分析系统（美国Media Cybernetics Inc公司）.
1.2方法
1.2.1免疫组织化学染色采用SP二步法进行检测. 选取组织蜡块进行连续切片，片厚4 μm，60～80℃烤片20 min，常规脱蜡，乙醇梯度水化，30 mL/L H2O2甲醇封闭内源性过氧化物酶活性，室温10 min，PBS(pH7.2～7.6)洗3次，每次5 min. 将切片浸入0.01 mol/L柠檬酸缓冲液(pH6.0)，微波炉加热至沸腾后断电，间隔5 min后重复1次，PBS洗3次，每次5 min. 滴加5 mL/L正常山羊血清封闭10 min，滴加1∶5000稀释的APE1一抗，湿盒内4℃冰箱保存过夜，滴加Power VisionTM复合物50 μL，37℃孵育30 min，DAB显色，苏木素复染. 采用磷酸盐缓冲液代替一抗作为免疫染色阴性对照，采用已知APE阳性的骨肉瘤标本作为阳性对照.
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