|
作者：马向东,吴小明,马兴,赵东涛,陈必良,辛晓燕,王德堂
【摘要】 目的： 研究妊娠合并糖尿病诱发胚胎先天性神经管缺陷的分子机制. 方法： 将29只SD雌性大鼠分为3组：① 正常对照组，8只；② 实验模型组，链脲佐菌素(STZ)构建的妊娠合并糖尿病诱发胚胎先天性神经管缺陷，12只；③ 实验对照组，STZ构建的糖尿病大鼠模型但胚胎不伴有先天性神经管缺陷发生，9只. 于妊娠第12日取出各组胚胎，解剖显微镜下进行形态学分析. 提取卵黄囊细胞mRNA，用cDNA基因芯片技术对表达差异基因进行检测. 提取卵黄囊细胞蛋白质，应用特异性抗磷酸化抗体进行免疫共沉淀及Western Blot，对MAP Kinase信号途径上各蛋白激酶活性进行分析. 结果： 提取实验模型组大鼠胚胎卵黄囊细胞mRNA，与正常对照组大鼠胚胎卵黄囊细胞mRNA共1200个基因同时进行比较，共筛选出表达差异基因79条，其中42条表达上调基因，包括凋亡相关基因BAX，bcl2，heat shock 70，glucosetransporter 3等；37条表达下调基因包括phospholipase A2，insulinlike growth factor Ⅱ receptor等. 与正常对照组相比较，ERK1/2蛋白激酶活性显著下降；JNK1/2活性明显升高，凋亡相关蛋白Caspase3，Bax高表达，凋亡抑制蛋白AKT活性明显受抑. 结论： 妊娠合并糖尿病诱发的胚胎先天性神经管缺陷的发生，与MAP Kinase及细胞凋亡信号传导机制参与密切相关.
【关键词】 cDNA；基因芯片；神经管缺陷；糖尿病；MAP kinase；细胞凋亡
0引言
妊娠合并糖尿病孕妇的胎儿(infants of diabetic mothers，IDM)重要器官先天性畸形的发生率高达 6％～10％，并直接导致50％的围产儿死亡率. 其中，高血糖内环境引起的胚胎先天性神经管缺陷的复杂病因，包括脂质、蛋白质代谢失调及超氧阴离子自由基的作用，引起胚胎卵黄囊细胞膜基本脂质成分缺失等原发性损伤［1］，表现出细胞信号传导的变化. 我们应用cDNA基因芯片技术［2］，对大鼠胚胎卵黄囊细胞1200个基因表达差异基因mRNA进行检测，旨在筛选参与先天性神经管缺陷发生的表达差异基因，并在此基础上深入揭示参与其发生的信号传导机制.
1材料和方法
1.1材料雌性SD大鼠29只，鼠龄70～90 d，体质量250～300 g （第四军医大学实验动物中心），与同种系的SD雄性大鼠交配后常规培养于动物中心. 链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)(美国Sigma公司)；总RNA标记和纯化试剂盒(Clontech, #K1038)；cDNA探针(AltlasTM cDNA Expression Arrays, Clontech, #PT31401).
1.2方法
1.2.1动物模型的建立将SD雌性大鼠与同种系无糖尿病的雄性大鼠交配，次日清晨阴道涂片发现精子的确定为受孕0 d. 将雌性大鼠分为正常对照组（n=8），常规饲养. 实验模型组（n=12），由STZ构建的妊娠合并糖尿病诱发胚胎先天性神经管缺陷，即于受孕第6日尾静脉注射65 mg/kg STZ. 实验对照组（n=9），由STZ构建的糖尿病大鼠模型但胚胎不伴有先天性神经管缺陷发生，每日采尾静脉血250 mg/d测血糖，符合妊娠合并糖尿病标准，否则从实验组中排除. 于受孕第12日从各组中取出胚胎.
1.2.2动物分组将29只SD雄性大鼠分为3组：① 正常对照组，8只；② 实验模型组（STZ构建的妊娠合并糖尿病诱发胚胎先天性神经管缺陷），12只；③ 实验对照组（STZ构建的糖尿病大鼠模型但胚胎不伴有先天性神经管缺陷发生），9只.
1.2.3总RNA提取及cDNA探针合成、标记应用总RNA标记和纯化试剂盒提取并纯化各组卵黄囊细 [1] [2] [3] [4] 下一页 |
用户登录 
新用户注册 