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【摘要】 ［目的］探讨附子抗心力衰竭的疗效及作用机制。［方法］用SD大鼠50只，随机分正常、空白对照组（简称Ⅰ号组）、模型组(简称Ⅱ号组）、地高辛组（简称Ⅲ号组）、附子水煎剂低剂量组（简称Ⅳ号组）、附子水煎剂高剂量组（简称Ⅴ号组）。除正常对照组外均采用尾静脉注射盐酸阿霉素(ADR)损伤大鼠心肌致心力衰竭。各组分别用药治疗后，测定大鼠血清中TNFα、NO水平，并应用光镜观察心肌组织的理变化。［结果］与正常对照组比较，心衰模型组大鼠血清中TNFα、NO水平升高；与心衰模型组比较，使用地高辛能显著降低心衰模型大鼠血清中TNFα、NO水平，差异显著(P<0.01)；而附子水煎剂高剂量、附子水煎剂低剂量则可轻度降低心衰模型大鼠血清中TNFα、NO水平，两组无明显差异(P>0.05),但这两组跟地高辛组差异显著(P<0.01)。光镜结果显示附子水煎剂高剂量组、附子水煎剂低剂量组心肌细胞损伤度均轻于心衰模型组，而地高辛组心肌细胞损伤度明显轻于心衰模型组。［结论］附子高、低剂量组能轻微改善心功能、减轻心衰症状，调节神经内分泌细胞因子水平，必要时应复方使用，方能收到满意的疗效。
【关键词】 附子 慢性充血性心力衰竭 NO TNFα SD大鼠
慢性充血性心力衰竭(CHF)也称慢性心力衰竭，是大多数心血管疾病的最终归宿，也是最主要的死亡原因。近年来用附子单味药治疗多种原因引起的心力衰竭的研究较少，本实验旨在复制CHF动物模型，从细胞因子水平探讨附子水煎剂对实验性CHF大鼠的作用机制，为临床CHF的综合治疗提供理论和实验依据。
1 实验材料
1.1 药物 附子水煎剂高剂量组、附子水煎剂低剂量组。按传统方法水煎，药液浓缩成100％，即每毫升含生药0.1g，4℃ 冰箱贮存备用；盐酸阿霉素(ADR)，山西普德药业有限公司生产，批号20070603；地高辛，广东邦民制药有限公司生产，批号060921，用蒸馏水稀释成0.2mg／ml，灭菌后备用。
1.2 实验动物 WISTAR大鼠50只，雌雄各半，体重250～300g，由重庆第四军医大学动物所提供。
1.3 主要试剂 一氧化氮(NO)试剂盒由上海贝西公司提供、(肿瘤坏死因子)TNFα试剂盒由上海西唐生物科技有限公司提供。
1.4 主要实验仪器及设备 哺乳类动物手术器械(手术刀、组织剪、有齿镊、止血钳、12号灌胃针、5ml注射器、4号头皮针等)高速低温冷冻离心仪(中国科技大学实业总公司中佳光学仪器公司)、低温冰箱、电子秤(湖南仪器仪表总厂天平厂)。
2 实验方法
2.1 动物分组及造模 取60只SD大鼠适应性喂养3d后，随机取10只(雌雄各半)作为Ⅰ号组(空白对照组)。尾静脉注射等体积生理盐水，给药容积同盐酸阿霉素。余50只大鼠用阿霉素造模，每kg／次／大鼠用4mg，每5天注射1次，共3次。末次ADR给药24h后，随机选取模型鼠2只，断头处死，取出心脏，用预冷0.9％生理盐水冲洗，取左室心肌部分，以10％甲醛固定，HE染色，光镜下观察确认造模成功后，再将所余大鼠随机分为Ⅱ号组(心衰模型对照组)、Ⅲ号组(地高辛治疗组)、Ⅳ号组(附子水煎剂低剂量组)、Ⅴ号组(附子水煎剂高剂量组)。各组均精饲料喂养，自由饮水。
2.2 给药方法 Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组造模后次日开始灌胃给药，连续给药21d，附子水煎剂低剂量组1～2 ml／kg，、附子水煎剂高剂量组4～6ml／kg，地高辛按1.6mg／kg进行，Ⅰ、Ⅱ组则以7～10ml／kg的生理盐水灌胃。
2.3 观察项目及检测方法
2.3.1 症状观察 观期间，察大鼠活动度、呼吸、发绀程度、毛发光泽、水肿、死亡等。
2.3.2 生化检验及病理学检查 灌药后第15天，股静脉取血，处理后分别用化学法及放免法测定各组大鼠血浆中NO、血清TNFα的水平，具体步骤按试剂盒说明书方法进行。最后放血处死大鼠，取左室心肌部分，以10％ 甲醛固定，常规石蜡包埋，病理切片，HE染色，光镜观察。
2.4 统计方法 SSPS1 1.0统计软件对所得结果进行处理，数据用均数±标准差(x±s)表示，组间差异采用单因素方差分析，计量资料用t检验。 3 实验结果
3.1 一般情况 整个实验期间，正常对照组(Ⅰ号组)大鼠毛色有光泽，双眼灵活有神，行动敏捷，对周围变化灵敏。余50只大鼠在第1、2次尾静脉注射ADR后先后出现症状，如活动减少、蜷缩、纳食减少、皮毛松软、体重减轻等，此后症状呈逐渐加重趋势，从第3次注射后出现程度不一的腹水，尿少便溏，唇周青紫，双耳苍白，呼吸减弱，毛色枯槁、散乱竖起，脱毛，严重者行走不稳，消瘦，口唇及双耳发绀，个别开始死亡，至第3次ADR注射时，50只大鼠中死亡6只，取2只大鼠作造模测试，余42只大鼠随机选分4组，Ⅱ组12只、Ⅲ组10只、Ⅳ组10只、Ⅴ组10只，雌雄各半。在用药阶段Ⅱ组又死亡4只，Ⅲ组死亡2只，Ⅳ组死亡3只，Ⅴ组死亡3只，故完整观察到40只，其中Ⅰ组10只，Ⅱ组8只，Ⅲ组8只，Ⅳ组7只，Ⅴ组7只。随后实验期间，用药组大鼠不再死亡，存活大鼠症状有明显改善，Ⅲ组症状改善比Ⅳ和Ⅴ组明显，而心衰模型组症状无明显改善。
3.2 大鼠TNFα、NO含量变化的测定 模型组血清TNFα、NO水平明显高于正常对照组及各治疗组，与两用药组比较有统计学意义(P<0.01)；附子水煎剂高剂量组与附子水煎剂低剂量组之间无明显差异(P>0.05)，但两组与地高辛组之间差异显著(P<0.01)，见表1。
表1 各组大鼠NO、TNFα含量变化（略）
与正常组比较，＃P<0.01、△P>0.05；与心衰模型组比较●P<0.01；与地高辛组比较，▲P<0.01
3.3 病理改变 光镜下可见正常组心肌细胞形态、胞质、间质及横(纵)纹均为正常，但心衰模型组存在心肌细胞横(纵)纹不清，部分区域肌质纤维溶解，胞浆空泡变性，不同程度的炎症细胞浸润和问质水肿病变表现。附子水煎剂低剂量组、附子水煎剂高剂量组、地高辛组以上病变较心衰模型有明显减轻，心肌细胞横(纵)纹存在。
4 讨论
本实验利用盐酸阿霉素的心肌毒性作用制备CHF模型。阿霉素是临床常用的广谱抗肿瘤药，具有引起心脏损害的严重毒性作用，主要损伤心肌细胞，引起类似扩张性心肌病样病理、生理改变和在此基础上的心力衰竭。使用阿霉素建立CHF模型成功率高，技术难度不大，适合研究衰竭心脏心超微结构改变、神经内分泌异常等［1］。
附子的功效是回阳补火、散寒除湿、温中止痛［2］。从实验结果看附子单用治疗CHF，效果没有地高辛组明显，有报道［3］：四逆汤能显著降低阿霉素致心力衰竭大鼠血清BNP和IL6水平，及CHF心肌细胞损伤程度，从而改善心功能、减轻心衰症状、降低死亡率。提示四逆汤不仅能直接加强心肌收缩力、扩张外周血管、减轻前后负荷、改善心脏舒缩功能，而且具有调节改善心衰大鼠神经内分泌功能的作用。因而可治寒邪深入少阴所致的阳虚寒厥证。附子有抗休克、强心，抗心肌缺血缺氧，能兴奋垂体－肾上腺皮质系统、抑制中枢神经系统及提高免疫功能等作用。但其组方四逆汤效更显。
NO在心血管系统中发挥作用的可能机制是通过提高细胞中鸟苷酸环化酶（guanylate cyclase, GC）的活性，促进磷酸鸟苷环化产生环一磷酸鸟苷（guanosine 3′, 5′-cyclic monophosphate cGMP），使细胞内cGMP水平增高，继而激活依赖cGMP的蛋白激酶对心肌肌钙蛋白Ⅰ的磷酸化作用加强，肌钙蛋白c对Ca2+的亲合性下降，肌细胞膜上K+通道活性也下降，从而导致血管舒张。本实验结果显示，正常对照组、地高辛组大鼠NO含量均显著低于附子水煎剂低、高剂量组和心衰模型组，说明地高辛能有效地降低血清NO水平，增强心肌收缩力、保护血管、心肌细胞，而单味附子效不显。地高辛组和附子水煎剂低、高剂量组差异明显(P<0.01)。
TNFα的局部升高可直接影响心功能，与心衰的发生有关。它导致的心肌机能障碍包括钙平衡的改变，直接的细胞毒作用，氧化张力、兴奋-收缩耦联的破坏，心肌细胞凋亡和坏死，心肌细胞丢失及被非心肌细胞取代，心室腔扩大,纤维结缔组织增生等构，心肌重塑的特征性改变。CHF时心脏本身合成释放TNFα是其重要来源之一。本实验结果显示正常对照组、地高辛组大鼠TNFα含量均显著低于心衰模型组和附子水煎剂低、高剂量组(P<0.01)，说明地高辛能有效地降低血清TNFα水平，保护血管、心肌细胞，而单味附子效不显。地高辛组和附子水煎剂低、高剂量组差异显著(P<0.01)。本实验对照组用药地高辛属洋地黄类强心剂，是目前治疗CHF的常用药物。强心苷对主要由机械紊乱导致的心衰疗效欠佳，如缩窄性心包炎、主动脉瓣狭窄、窦性心律的二尖瓣狭窄、肥厚型心肌病等。而对收缩功能抑制状态的疗效较好。在窦性心律的心衰患者，停用地高辛，仍用利尿剂者未见心衰恶化；停用地高辛，继续使用扩血管药及利尿剂者在临床及左心射血分数、每分钟搏出量等与使用地高辛时无显著变化。若地高辛通过增加细胞内Ca2+的浓度而产生正性肌力作用，则在长期用药后，细胞内Ca2+和Na+将恢复到正常水平，地高辛的正性肌力作用将减弱或消失，因此窦性心律的心衰患者应用维持量地高辛2个月以上时，停用地高辛不会引起病情恶化。经血流动力学研究证实长期服用维持量地高辛治疗慢性心衰有效。本实验结果表明，附子水煎剂组降低阿霉素致心力衰竭大鼠血清TNFα、NO水平及CHF心肌细胞损伤程度不显著，提示附子单味附子不能直接加强心肌收缩力、扩张外周血管、减轻前后负荷、改善心脏舒缩功能，而且调节改善心衰大鼠神经内分泌功能的作用不强。
【参考文献】
［1］ 郭豫涛.充血性心力衰竭的动物模型［J］.上海实验动物科学，2001，21(2)：122.
［2］ 黄泰康.现代本草纲目［M］.（上卷）.北京：中国医药科技出版社，2000.
［3］ 黄波，朱奔奔.四逆汤对慢性充血性心力衰竭模型大鼠BNP、IL6水平的影响［J］.贵阳中医学院学报，2006，6（26）. |
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