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软骨缺损区被薄层白色组织填充，缺损区均未完全填平，表面呈白色，半透明、不光滑、质地软、弹性差，与周围正常软骨的分界线清楚。D组缺损区被薄层纤维斑痕组织覆盖，缺损明显。术后12周，A组表面光滑，呈白色，完全填平缺损区，肉眼观与周围软骨相比，质地、色泽近似，表面与正常关节面平齐，与周围正常软骨的界限基本消失； B、C组外观相似缺损区大部分被白色，半透明组织填充，外观与周围关节面界限清晰，表面有小的突起，质地软、弹性差； D组缺损仍然存在，薄层斑痕增生，色泽灰暗，周围正常软骨的分界线清楚。
2.2 光镜组织学观察各组软骨缺损的修复情况
第8周，A组新生软骨组织细胞呈圆形和卵圆形，排列不规则，细胞密度大于正常软骨，软骨陷窝明显，表明修复组织大都为纤维软骨，仅少量软骨呈透明样，表面无严重的纤维化，且新生组织高于正常周围软骨平面（见图1）； B、C对照组新生组织细胞呈圆形或卵圆形，形成少量纤维软骨，无透明软骨形成，与周围组织界限明显（见图2）；D组软骨缺损区为斑痕组织覆盖含有少量软骨细胞。第12周，A组缺损基本愈合，修复组织细胞密度显著降低，基质均匀，细胞形态和排列接近正常软骨，修复软骨呈透明软骨样(见图3)； B、C对照组缺损表面不光滑，软骨细胞排列不规则，细胞密度小于正常；D组形成大量的纤维瘢痕组织，仅有少量纤维软骨，无透明软骨形成，与周围分界明显（见图4）。表2 Wakitani评分标准
2.3 各组不同时间点标本
光镜组织学评分
A、B、C、D数据利用dunnett检验将评分结果进行方差分析,P<0.05.A组关节软骨缺损的再生修复明显优于对照组B、C，D组，差异具有统计学意义，B、C组明显优于D组差异具有统计学意义。
3 讨论
Calandruccio等1962年首次发现应用软骨下骨钻孔术可以治疗关节软骨缺损［2］。国外Shapiro(1993年)、国内葛志强［3］等以兔为实验对象，行软骨下骨钻孔术修复全层关节软骨缺损，实验证实缺损区有新生透明软骨修复，钻孔对关节功能无不利影响。1999年德国学者Steadman等［4］报告临床应用“微骨折”技术修复关节软骨缺损，即采用特制的骨刀在软骨下骨表面造成“微骨折”，以提供组织再生的适宜环境和激发自身修复潜能，使关节面得以修复，经随访疗效满意。
碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)广泛存在于脑、垂体、肝、肾、骨、软骨、角质细胞、血管平滑肌细胞、成肌细胞、星形细胞等组织中,是重要的有丝分裂促进分子，也是形态发生和分化的诱导因子，在正常生理及病理过程中参与生长发育和组织损伤的修复过程。bFGF对中胚层及神经外胚层来源的细胞都有强烈的促有丝分裂作用，能在极低浓度水平(1 ng／ml)发挥活性［5］,对肢体发育和塑性尤为重要，对神经元的存活及突起的生长也有强的促进作用，此外还可刺激血管生长，软骨修复及骨折愈合等广泛的生物学效应。
在体内，生长分化因子要有载体的保护，以避免因稀释或快速降解而失去其生物活性。因此，探寻具有保护和缓释作用的理想载体十分重要。纤维蛋白胶是由纤维蛋白原在凝血酶和钙离子作用下形成的凝胶物质，其作为软骨组织工程支架具有以下优点：①水凝胶水分含量高，摩擦系数少，和软骨相似，事实上软骨是胶原、硫酸软骨素和其他多聚糖共同形成的水凝胶； ②水凝胶基质通过保持软骨细胞外型而增强其功能； ③通过水凝胶基质bFGF被均匀分配，防治其流失； ④水凝胶有弹性、亲水性，亲水性物质可以自由扩散。纤维蛋白胶是天然水凝材料，具有无毒、无免疫型、可塑性好、具有良好生物相容性和生物降解性等优点，可以直接注射，便于关节镜下使用，是良好的生物载体。
本实验采用的克氏针手摇钻在软骨下骨表面形成微骨折，表现为骨小梁发生穿孔、断裂。微骨折后的修复组织主要来源于松质骨间充质细胞，属于外源性修复。软骨下骨出血由红细胞、白细胞和少量的未分化细胞组成。缺损形成后不久。纤维蛋白凝块迅速填充，同时松质骨内多种功能间充质细胞发生增殖。凝块可使骨释放生长因子，血小 上一页 [1] [2] [3] [4] 下一页 |
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