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益肾汤对实验性IgA肾病模型小鼠肾组织转化生长因子β1表达的影响 |
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| 益肾汤对实验性IgA肾病模型小鼠肾组织转化生长因子β1表达的影响 |
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肾小球囊腔粘连，肾小球毛细血管管腔挤压变窄，而正常对照组小鼠肾小球未见明显异常（图1）；免疫荧光检查结果显示模型组小鼠系膜区IgA+++，而正常对照组小鼠系膜区IgA-～±（图2）。
22肾组织TGFβ1含量的测定由表1可见，模型组小鼠肾组织TGFβ1含量显著高于正常对照组（P＜005）；益肾汤高、低剂量组小鼠肾组织TGFβ1含量均显著低于模型组（P＜005）；益肾汤高、低剂量组小鼠之间肾组织TGFβ1含量无显著性差异（P＞005）。各组小鼠肾组织TGFβ1表达见图3：正常对照组有少量TGFβ1表达；模型组TGFβ1表达明显增强；益肾汤高、低剂量组TGFβ1表达减弱。表1各组小鼠肾组织TGFβ1 阳性表达单位值比较
23TGFβ1 mRNA表达结果TGFβ1 mRNA标准扩增曲线见图4；TGFβ1 mRNA标准曲线直线回归见图5；各样本TGFβ1荧光扩增曲线见图6；各组肾组织TGFβ1 mRNA表达的差异见表2。表2结果显示模型组小鼠肾组织TGFβ1 mRNA的表达显著高于正常对照组（P＜005）；益肾汤高、低剂量组小鼠肾组织TGFβ1 mRNA的表达均显著低于模型组（P＜005）；两个益肾汤治疗组小鼠之间肾组织TGFβ1 mRNA的表达无显著性差异（P＞005）。图5为小鼠TGFβ1荧光定量标准回归曲线图，横坐标为起始拷贝数的对数，纵坐标为阈循环数nCt，相关系数r=0998 6。线性关系良好，证实了nCt值进行定量的准确性。通过荧光定量PCR的扩增得知样本的nCt值，即可从该标准回归曲线上计算出该样本的起始拷贝数。
表2各组小鼠肾组织TGFβ1 mRNA定量表达比较
3讨论
IgAN是目前公认的发病率最高的原发性肾小球疾病，其主要病理特点是：肾脏系膜细胞和系膜基质增生［3］。IgAN系膜细胞和基质增生是多种因素综合作用的结果，多种细胞因子的作用与IgAN的发生和进展有关［4］。TGFβ1作为一种多功能的细胞因子，通过细胞表面复杂的受体信号传导途径调控细胞的增殖、分化和凋亡［1］，特别在调控细胞外基质聚积(ECM)的过程中起中心调节作用，其主要机制有： (1)增加ECM的合成；(2)增加蛋白酶抑制因子的合成，减少ECM的降解；(3)增强细胞表面与ECM结合的受体—整合素的表达。近年来研究发现TGFβ1在IgAN的发生、发展中均有十分重要的作用，IgAN的血尿可能是因为链球菌感染后通过增加TGFβ1合成从而刺激IgA产生并最终导致IgAN的发生［5］；在IgAN的进展过程中肾内肾素血管紧张素系统（RAS）和通过TGFβ1介导的早期纤维化密切相关［6］。FQPCR原理［7］：利用Taq酶对荧光双标记探针的切口平移效应，连续不断地检测反应体系中荧光信号的变化，当信号增强到某一阈值时，此时的循环阈值（nCt值）就被记录下来，该参数和PCR体系中起始DNA量的对数值之间有严格的线性关系，利用阳性梯度标准品的nCt值制成标准曲线，再根据样品的nCt值就可以准确定出起始DNA的数量。中医学认为IgAN属本虚标实之证，以肺、脾、肾三脏虚弱为本，外感、水湿、湿热、瘀血及湿浊为标［8］。研究表明［9］，ECM聚积与中医的“血瘀”有密切的联系，益气、化瘀法是中医治疗肾小球疾病的常用治法，有确切的疗效。益肾汤是在古代名方六味地黄丸（《小儿药证直诀》）基础上，结合临床用药体会加减化裁而成。方中熟地甘柔补血、滋肾填精，当归补血活血；山茱萸、枸杞子、女贞子滋养肝肾固肾气，黄芪补气升阳，山药健脾益胃以助运化，茯苓渗利脾湿，牡丹皮凉泻肝火，生地、赤芍、白茅根清热凉血，金樱子固精，旱莲草滋阴，仙鹤草收敛。诸药合用，具有滋阴补肾固精、清热凉血活血之功效，主治肝肾阴虚之证。益肾汤组方中，多味中药均有益气、活血、化瘀之功效［10-11］，因此，益肾汤治疗IgAN符合中医学及现代医学对IgAN病因、病理、病机规律的认识。已有临床验证益肾汤具有减少IgAN患者的蛋白尿、稳定患者肾功能的作用［12］。本实验结果显示，IgAN模型小鼠肾组织TGFβ1的分泌及其mRNA表达显著升高，提示TGFβ1参与了IgAN的发病过程，对IgAN模型所见的ECM增加有重要意义；益肾汤治疗组小鼠肾组织中TGFβ1的分泌及其mRNA表达较IgAN模型组显著减少，显示益肾汤可抑制IgAN肾组织中TGFβ1的表达、减少ECM的合成，进而延缓IgAN肾小球硬化的进展。
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