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久。广藿香生产中面临青枯病的危害，该病由青枯菌（Ralstonia Solanacearum）侵染所致，为典型的维管束病害［2~3］。在我国产区栽培的广藿香，罕见开花结实［4］，长期以来，生产上采用扦插繁殖，病原体通过无性繁殖传递，且逐代积累，危害越来越严重，迫切需要进行抗病品种的选育。近年来，基因转移及人工诱变等改良药用植物农艺性状的技术，为广藿香抗病育种提供了可能，而要开展相关的研究，首先要建立高效的组织培养再生系统。本文以广藿香多种外植体为材料，筛选影响广藿香愈伤组织诱导、增殖及分化的多种因素，以期建立高效的愈伤组织诱导及分化再生植株的离体再生系统，为遗传转化及人工诱变育种奠定基础，现报道如下。
1材料和方法
11材料试验
材料采自广州中医药大学药圃，选择生长健壮、无病虫害的广藿香单株，取其顶芽、带节茎及叶片；经蒸馏
水冲洗干净后，用体积分数为70%乙醇浸泡30s，转入1g/L的HgCl2溶液浸泡消毒10min，再用无菌水漂洗5～8次，把残留HgCl2漂洗干净，接种于 Murashge and Tucker（MT）+02mg/L 6苄氨基嘌呤(BA)培养基上，诱导丛芽的生成，待丛芽长出后将其移至MT培养基中培养，试管苗长至5～7cm时即可作材料使用。
12方法
121外植体培养
取广藿香试管苗的叶片、带节茎、不带节茎及根尖为外植体进行培养。外植体在培养基中的放置方式为：叶片及根尖平放，带节茎及不带节茎为形态学下端下插。每种处理接种外植体数为30块左右，设置3次重复。
122愈伤组织的诱导
增殖以广藿香叶片及带节茎等诱导愈伤组织，选取未分化出芽的愈伤组织接种至增殖培养基中。每种处理一般接种30块愈伤组织，设置3次重复。诱导及增殖培养基即以MT培养基为基础，根据试验要求添加不同浓度的6苄氨基嘌呤(BA)、α萘乙酸(NAA)、N苯基N'123噻二唑5脲(TDZ)及二氯苯氧乙酸(24D)等植物激素组成。
123愈伤组织的分化
以实验中诱导的愈伤组织为材料，接种至分化培养基中培养。每种处理一般接种30块愈伤组织，设置3次重复。分化培养基以MT为基础培养基，根据试验要求添加不同浓度的BA、6糠氨基嘌呤(KT)、NAA、3吲哚乙酸(IAA)、TDZ及24D等植物激素。
124无根苗的诱导
生根及移栽将愈伤组织分化获得的再生苗接种至生根培养基MT+ 02mg/LIBA中，进行诱导生根，生根后进行炼苗和移栽。
13培养条件
培养室温度保持（26±1）℃，每天光照12h，光照强度为2 500～3 000Lx。
2结果与分析
21愈伤组织的诱导
以广藿香试管苗的叶片及带节茎等为材料，成功诱导出愈伤组织（图1-a，彩图见第200页），并考察了不同植物激素及不同BA浓度对愈伤组织诱导的影响，同时，观察了不同外植体诱导愈伤组织能力的差异，以找出适合广藿香愈伤组织诱导的培养基及外植体种类。
211不同植物激素对愈伤组织诱导的影响
以广藿香的带节茎和不带节茎为材料，设置不同植物激素及不同激素组合进行试验。结果显示，不添加任何植物激素及单独使用细胞分裂素（BA、TDZ）未能诱导出愈伤组织，单独使用生长素（NAA、24D）诱导出的愈伤组织灰白色，呈水浸状，其生长势较差。细胞分裂素与生长素结合，能成功诱导出愈伤组织，愈伤组织呈乳白色或灰白色，半透明、疏松状，生长势较好。如BA和NAA结合，培养10d后，100％的外植体产生愈伤组织；BA和24D配合使用时，10d后愈伤组织诱导率达85%以上，15d后诱导率为100％；TDZ和NAA或24D配合使用，10d后愈伤组织诱导率为80%以上，15d后诱导率均为100％，含有24D的培养基中愈伤组织的生长势较含有NAA处理者稍好，愈伤组织颜色更深，为灰白色。带节茎和不带节茎培养，均能成功诱导出愈伤组织，在培养10d时，带节茎愈伤组织诱导率略高于不带节茎，其生长势亦较好。添加24D诱导的愈伤组织，在愈伤组织培养一段时间后，会出现褐化现象，且部分死亡。因此愈伤组织诱导时，采用BA或TDZ与NAA结合较好，结果见表1。表1不同植物激素对愈伤组织诱导的影响（略）注：－ 无愈 上一页 [1] [2] [3] [4] [5] 下一页 |
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