| 论临床医学检验中的流式细胞技术 |
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接免疫荧光染色、直接免疫荧光染色、多色免疫荧光染色等方法进行检验,流式细胞仪可同时鉴别单个细胞上的多种抗原,而且在极短的时间内能分析大量的细胞,使流式细胞技术成为了当前较为先进的细胞分析技术,在临床应用上也较为广泛,例如:血液淋巴细胞免疫表型、白血病细胞免疫表型、血小板免疫表型等。
3.2血液淋巴细胞免疫表型分析方法
血液淋巴细胞的免疫表型分析方法有2种,首先是双色荧光分析血液淋巴细胞免疫表型,其主要是通过2种荧光色素标记的2种单克隆抗体与全血中的淋巴细胞膜特异性抗原结合,在溶解红细胞后,洗涤去红细胞碎片和未结合的抗体,固定细胞,在流式细胞仪上计数各种淋巴细胞亚群的百分率;其次是多色荧光分析血液淋巴细胞免疫表型,其主要采用3种荧光素标记的单克隆抗体同时进行免疫荧光染色,以CD45/SSC设门分析血液中淋巴细胞免疫表型,比双色分析更为准确地鉴别淋巴细胞亚群,避免细胞碎片,溶血剂不能破坏的红细胞。
3.3流式细胞内或细胞核内抗原分析
流式细胞内或细胞核内抗原分析主要是以多色流式细胞免疫表型分析为主,其主要应用于白血病和淋巴瘤分型、微量残留白血病或淋巴瘤细胞的检测,白血病与淋巴瘤细胞内或核内抗原标志物一般与细胞膜表面抗原同时检测,通过多色免疫荧光染色后进行多参数分析。细胞内或核内抗原与表面抗原检测主要区别在于对细胞膜和核膜进行穿透处理,使细胞膜和核膜上出现可以让荧光素标记的单克隆抗体自由通过的微孔,但又不能使细胞的结构完全破坏,并保持靶抗原的抗原性不变和细胞的光散特点不变。具体步骤可以概括为:膜表面抗原免疫荧光染色、溶解红细胞、固定与透膜处理、细胞内或核内免疫荧光染色、多色流式细胞分析。
4临床医学检验中流式细胞技术的应用
4.1基于流式细胞技术的血小板分析
论文联盟www.LWlm.CoM
流式细胞技术的血小板分析是对单个血小板或血小板亚群进行分析,其基本原理是用不同的荧光色素标记的单克隆体或能与所测成分发生特异性结合并能发射荧光的物质与全血或分离的血小板反应,去除未反应的单克隆抗体或荧光物质后,在流式细胞仪上特异检测5000～10000个以上血小板的光散射与荧光信号,获取、储存、分析和统计数据,并根据光散射和荧光的强弱,特异地分析血小板,计算出阳性血小板的百分率上一页 [1] [2] [3] 下一页 |
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