小麦总RＮA的小量快速提取

　摘要：以小麦幼苗的叶、茎和根组织为材料，采用ＣＴＡＢ法和尿素法分别提取其总ＲＮＡ。结果表明，ＣＴＡＢ法提取的总ＲＮＡ 经电泳检测，２８S ｒＲＮＡ和１８S ｒＲＮＡ带型完整；Ａ２６０／Ａ２８０的比值接近２，纯论文联盟*度较高；将提取的总ＲＮＡ反转录合成ｃＤＮＡ，可用于ＲＴ－ＰＣＲ分析。尿素法提取叶和茎组织的总ＲＮＡ质量较好，但提取根组织的效果较差。说明ＣＴＡＢ法较适合小麦幼苗各组织总ＲＮＡ的提取。同时，两种方法提取过程中均不使用液氮，可节约试验成本。
　　关键词：小麦；总ＲＮＡ；提取
　　　　
　　高质量ＲＮＡ的提取是分子生物学研究的重要一环，直接影响ｃＤＮＡ文库的构建、基因克隆以及表达分析等。小麦是重要的农作物，其ＲＮＡ提取方法较多［１－５］。尽管这些方法提取的ＲＮＡ质量较好，但都要使用液氮，提高了试验成本。本研究采用ＣＴＡＢ和尿素法分别提取小麦幼苗的根、茎和叶组织的总ＲＮＡ，为小麦总ＲＮＡ的提取提供了一条新途径。
　　１ 材料与方法
　　１．１植物材料
　　小麦杂交品种郑麦９０２３购于荆州市农资大市场，播种于温室，在苗期分别取根、茎和叶组织用于ＲＮＡ的提取。
　　１．２方法
　　１．２．１ＲＮＡ提取液成分ＣＴＡＢ法ＲＮＡ提取液成分：２０ ｇ／Ｌ ＣＴＡＢ，２０ ｇ／Ｌ ＰＶＰ，１００ ｍｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ值 ８．０），２５ ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎａ２ＥＤＴＡ（ｐＨ值８．０），２．０ ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌ，混匀灭菌，用前每１００ ｍＬ提取液加入２ ｍＬ ２－巯基乙醇。
　　尿素法ＲＮＡ提取液成分：７ ｍｏｌ／Ｌ 尿素，５０ ｍｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ－HＣｌ（ｐＨ值８．０），１０ ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎａ２ＥＤＴＡ（ｐＨ值８．０），３．５ ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌ，１ ｇ／Ｌ ＳＤＳ。
　　１．２．２ＲＮａｓｅ灭活离心管和移液器吸头用１ ｍＬ／Ｌ ＤＥＰＣ水浸泡２４ ｈ；研钵等用少量的无水乙醇灼烧，然后用锡箔纸包装；Ｔｒｉｓ试剂用灭菌的１ ｍＬ／Ｌ ＤＥＰＣ水配制，其他试剂均用未灭菌的１ ｍＬ／Ｌ ＤＥＰＣ水配制；最后，将以上所有试剂或物品高压灭菌４０ ｍｉｎ。
　　１．２．３尿素法提取ＲＮ

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