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【摘要】 ：［目的］以Fe2+作为中心金属离子，合成一种氨基酸配合物甘氨酸亚铁（FeGly2），并对其补血作用进行研究。［方法］用甘氨酸和Fe2+合成螯合铁，同时用红外光谱和原子吸收光谱对甘氨酸亚铁结构进行测定；并用大鼠贫血模型，观察甘氨酸亚铁补血作用。［结果］缺铁性贫血大鼠灌胃给予200mg/kg FeGly2和300mg/kg FeSO4制剂后，血液中血红蛋白（Hb）明显增加（P<0.01），而且200 mg/kg FeGly2和300mg/kg FeSO4制剂的升高血红蛋白含量的作用相当。［结论］甘氨酸亚铁具有改善大鼠缺铁性贫血的作用。
【关键词】 甘氨酸亚铁；FeSO4制剂；缺铁性贫血模型
Abstract：［Objective］ To synthesize an amino acid coordinately compounds Ferrous Glycine Sulfate(FeGly2) using Fe2+ as central iron and study the effect of blood enrichment. ［Method］To synthesize the chelate iron using glycin and Fe2+ and measure the constructor of Ferrous Glycine Sulfate by IR spectrum and atomic absorption spectroscopy. To observe the blood enrichment effect of FeGly2 by rat anemia model. ［Result］ After separately treatment with 200 mg/kg FeGly2 and 300 mg/kg FeSO4 by intragastric administration, the haemoglobin in blood of hypoferric anemia rat increased obviously(P<0.01). ［Conclusion］ Ferrous Glycine Sulfate can ameliorate irondeficiency anemia state in rat.
Key words: Ferrous Glycine Sulfate; FeSO4 preparation; irondeficiency anemia model
缺铁传统的治疗方法是选用补铁药物硫酸亚铁，但由于对胃、肠等消化道刺激性大，有一定的副作用，所以本实验采用甘氨酸亚铁，配合物氨基酸铁是由两个以上配合体与铁离子形成环状结构的螯合物，这种螯合物的分子内电性趋向中性，且稳定系数比较适中，从而使金属易在消化道释放出来，因此，氨基酸铁作为微量元素营养比相应的无机离子更有优越的性能。本实验通过对低铁性贫血模型大鼠的实验，观察FeGly2对低铁性贫血大鼠的血液中血红蛋白的影响。
1 材料
1.1 实验动物
清洁级SD雄性大鼠，体重250～300g，40只，由浙江省医学科学院动物中心提供［SCXK（浙）20030002］。
1.2 试剂和仪器
铁制剂（FeSO4制剂），七水硫酸亚铁（FeSO4·7H2O），甘氨酸(H2NCH2COOH，Gly)，95%乙醇，去离子水，血红蛋白转化液，Nicolet E.S.P560红外光谱仪，XT4熔点测定仪，AA670原子吸收测定仪，分析天平，TU1800(SPC)紫外分光光度计等。
2 方法
2.1 甘氨酸亚铁合成［1］
取甘氨酸10.8g，加水70ml水浴50℃下搅拌溶解；取FeSO4·7H2O 40g，加入反应液，以 N2作为保护气，水浴温度保持在60℃，溶液从亮棕色至黄色浑浊液，趁热滤去黄褐色沉淀物，过滤液为淡绿色或浅黄绿色透明溶液，冰箱冷置过夜；用重结晶法共得淡绿色结晶物为31.95g，收率为81.4%。
2.2 甘氨酸亚铁鉴定［2］
用XT4熔点测定仪测定甘氨酸亚铁的熔点；原子吸收光谱测定：取一定的甘氨酸亚铁用AA670原子吸收测定仪测定Fe离子；用红外光谱仪对甘氨酸亚铁做红外光谱分析，并和纯品甘氨酸比较。 2.3 模型制作
取30只雄性SD大鼠，每天尾部放血3～4ml，而且在试验期间（包括给药），喂予缺铁饲料和双蒸水，连续5d，至血红蛋白含量为8～9g/L，造成大鼠缺铁贫血模型。
2.4 分组及给药
造模第6天，30只贫血大鼠尾静脉取血测定血液中血红蛋白含量，并按血红蛋白含量均匀分为3组，分别为模型对照组、试药组（200 mg/kg FeGly2）和阳性对照组（300 mg/kg FeSO4制剂），每组10只，另取10只正常大鼠做正常对照组。分组当天开始给药，试药组和阳性对照组分别灌胃给予200mg/kg FeGly2和300mg/kg FeSO4制剂，正常对照组和模型对照组灌胃给予同等容积的双蒸水，1次/d，连续给药5d。
2.5 观察指标
每日给药24h后，用定量采血管在尾静脉取血10μl，测定血红蛋白。用氰化高铁血红蛋白测试法测定大鼠血液中血红蛋白。取血红蛋白稀释液2.5ml，加全血10μl，混匀后，静置30min。用分光光度计测定吸光度（A），以稀释液作空白，波长540nm，比色杯光径1cm。公式：Hb(g/L)=(A×251×16114.5)/(11.0×1.0×1000)=A×36.77。
3 结果
3.1 甘氨酸亚铁鉴定结果
甘氨酸亚铁熔点在165～185℃（甘氨酸亚铁mp:165～185℃，甘氨酸mp:220～230℃，FeSO4 mp:>330℃）；甘氨酸亚铁原子吸收测定结果，Fe离子占 20.30%（Cal：Fe = 20.23%），纯度为99.65%；甘氨酸亚铁和甘氨酸的红外光谱分析结果，图1，2可以看出，甘氨酸的红外光谱在26003100/cm有较强宽谱带，这是NH3+的特征吸收峰，而甘氨酸亚铁的红外光谱中无此吸收峰，说明甘氨酸亚铁中没有游离的NH3+，同时，甘氨酸在2100/cm处有一个较强的吸收峰，这是二氨基酸的特征吸收峰，而甘氨酸亚铁中无此吸收峰。因此可以确定甘氨酸亚铁中没有游离的甘氨酸存在。
3.2 甘氨酸亚铁补血作用
由表1结果可见，与正常对照组比较，模型对照组大鼠血液中血红蛋白含量明显降低（P<0.01）；与模型对照组比较，试药组（200mg/kg FeGly2）和阳性对照组（300mg/kg FeSO4制剂）大鼠给药后，血液中血红蛋白明显增加（P<0.05），200mg/kg FeGly2和300mg/kg FeSO4制剂的升高血红蛋白含量的作用相当。表1 甘氨酸亚铁对贫血模型大鼠血液中血红蛋白的影响（略）
4 讨论
本实验采用放血加缺铁的方法建立大鼠贫血模型，以低铁饲料作为日常饲料，并每天尾部静脉放血，连续5天后，血红蛋白含量低于与正常组大鼠达4～5g/L。正常人血红蛋白的浓度与红细胞数目密切相关，两者一般呈平行关系。但由于贫血原因不同，两者又不绝对平行，由于缺铁性贫血(小细胞性贫血)血红蛋白减少程度比红细胞减少更严重，所以在缺铁性或铁利用障碍性贫血时，测定血红蛋白比计数红细胞更为准确。通过检测贫血模型大鼠血红蛋白OD值，可间接反映出各组Hb浓度的恢复情况。实验中缺铁性贫血大鼠灌胃给予200mg/kg FeGly2和300mg/kg FeSO4制剂后，血液中血红蛋白明显增加，而且200mg/kg FeGly2和300mg/kg FeSO4制剂的升高血红蛋白含量的作用相当。
口服无机形式铁，如硫酸亚铁、乳酸亚铁常被作为治疗营养缺铁性贫血的主要铁剂形式，预防和治疗贫血的效果是肯定的，但这此铁剂存在较强铁腥味和胃肠适刺激等副作用，限制了铁剂的长期使用。而甘氨酸亚铁是螯合物，具有良好的理化性质和生物活性，与其他的铁剂相比具有适口性好、副作用小、吸收率高的特点，容易被人体吸收，是一种较理想的补充铁的营养强化剂。
【参考文献】
［1］Ashmead H.D.;B.Beck,H.Hopson.1997,A New Approach To Reduction of Piglet Mortality［J］. Mordern Veterinary Practice, 1999,(16):509515.
［2］Wheby M.S.,Grace M.D.Intestinal absorption of hemoglobin iron［J］.Gastroenrology, 1970,58(5):647654. |
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