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槲寄生生物碱通过P53途径抑制肝癌细胞株SMMC7721的研究 |
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| 槲寄生生物碱通过P53途径抑制肝癌细胞株SMMC7721的研究 |
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O)，胎牛血清(杭州四季青公司)，二甲基亚砜、MTT(Amersco)，RNA提取试剂盒、RT-PCR试剂盒（宝生物公司），琼脂糖（Promega），引物（上海生工）、Forma CO2培养箱（美国），ELX-800酶标仪（美国），Enpddorf低温离心机（德国），PCR仪(美国)，紫外分光光度计（日立），倒置显微镜、凝胶成像系统（上海康乐）。
1.1.3 药物 槲寄生购于包头益仁堂中药房，山西医科大学药学系扬官娥教授鉴定该中药为槲寄生并非其他寄生。槲寄生生物碱由本校化学教研室予以提取。将提取物以碘-碘化钾试剂、碘化汞钾试剂检验呈阳性反应，证明提取物为槲寄生生物碱。
1.2 方法
1.2.1 体外细胞培养 细胞培养于含10%胎牛血清、100mg/L青霉素、100mg/L链霉素的RPMI1640培养基中, 37℃、5%CO2培养箱中培养,每2天换液1次。
1.2.2 MTT法测定槲寄生生物碱对肝癌细胞增殖的影响 取对数生长期的肝癌细胞调整至1×105/mL，取0.200mL接种于96孔板，置37 ℃、5%CO2培养24h后弃原培养液,加入浓度为0.200mg/mL、0.100mg/mL、0.050mg/mL、0.025mg/mL槲寄生碱培养液各0.200mL，每个浓度设6个复孔，分5次重复，并设阴性对照、5-Fu阳性对照（10μg/mL）和空白对照孔，同时作3个板。分别作用24h、48h、72h后倾去上清液,用D-Hanks洗涤2次，各孔加入5%MTT 0.020mL，37℃4h后吸去上清液,加入DMSO 0.150mL,振荡10min使结晶充分溶解后上酶标仪490nm处测吸光度A值。抑制率(%)=(对照孔A值-实验组A值)/对照孔A值×100 %。依据MTT结果用改良寇氏法计算IC50。 1.2.3 槲寄生生物碱对人肝癌细胞SMMC-7721P53 mRNA表达影响的测定 （1）细胞给药：取对数生长期的SMMC- 7721细胞调整至2×105/ mL,2.500mL接种于6孔板,置37℃、5 %CO2培养箱，培养24h后弃原培养液,对照组加入不含药 上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] 下一页 |
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