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槲寄生生物碱通过P53途径抑制肝癌细胞株SMMC7721的研究 |
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| 槲寄生生物碱通过P53途径抑制肝癌细胞株SMMC7721的研究 |
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物的培养基2.500mL，试验组依据MTT结果加入含浓度为0.100mg/mL槲寄生生物碱培养液2.500mL培养24h(抑制率为38%)。（2）总RNA的提取：用RNAiso Reagent提取试剂,经氯仿抽提、异丙醇沉淀，分别提取实验组和对照组细胞总RNA。提取的总RNA用紫外分光光度计在260nm和280nm下检测其吸光度值，以A260nm/A280nm比值表示其纯度。（3）引物设计：参考文献[5-6]及GenBank中基因序列设计引物。P53上游引物：5′-TGTCCCCGGACGATATTGAAC-3′，下游引物：5′-TTCCTTCCACTCGGATAAGATGC-3′；β-actin上游引物：5′-GTGGGGCGCCCCAGGCACCA-3′，下游引物：5′-CTCCTTAATGTCACGCACGATTTC-3′。（4）RT-PCR反应：逆转录取总RNA 1μL按反转录试剂盒要求配成10μL反应体系，实验组和对照组分别进行逆转录PCR反应。转录条件为30℃ 10min、50℃ 20min、99℃ 5min、5℃ 5min，共一个循环。（5）PCR反应：β-actin扩增条件: 94℃预变性2min，94℃ 30s，55℃ 30s，72℃ 1min，35个循环,72℃延伸8min。P53扩增条件：94℃预变性2min，94℃30s，56℃30s,72℃1min,35个循环,72℃延伸8min。
1.2.4 半定量分析 将扩增的RT-PCR产物在2%琼脂糖凝胶中电泳45min。电泳结束后在紫外透射仪下观察电泳条带,于凝胶成相仪上进行目的条带的密度定量,以目的基因条带的密度与内参β- actin的密度之比作为该目的基因的mRNA的相对含量。
1.2.5 统计学处理 实验结果用SPSS 11.5统计分析软件处理，数据用x±s表示，行t检验,以P＜0.05为差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 槲寄生生物碱对细胞增殖的影响 槲寄生生物碱对SMMC-7721细胞有显著生长抑制作用，且呈剂量和时间依赖方式，0.100mg/mL和0.200mg/mL浓度组在24h、48 上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] 下一页 |
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