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尿毒清胶囊人含药血清抑制尿毒症毒素血清刺激的肾小管上皮细胞2增殖与转分化作用观察           
尿毒清胶囊人含药血清抑制尿毒症毒素血清刺激的肾小管上皮细胞2增殖与转分化作用观察
化形成中占重要地位。尿毒症毒素血清能促进肾小管上皮细胞增殖及转分化已得到证实[2]。益气升清、通腑泄浊法组方尿毒清胶囊对5/6肾切除所致肾功能衰竭大鼠肾组织胶原沉积、转化生长因子β1(TGFβ1)表达具有抑制作用[3],但对人肾间质纤维化中起重要作用的肾小管上皮细胞(HK2)增殖、转分化的作用尚未明了。本研究观察正常人的尿毒清胶囊含药血清对尿毒症毒素血清刺激的HK2增殖、转分化的影响,现将研究结果报道如下。

  1材料与方法

  11主要试剂与仪器RPMI1640培养基为美国Gibco公司产品,新生胎牛血清为杭州四季青生物材料工程有限公司产品,四氮唑蓝(MTT)、二甲基亚砜(DMSO)、25 g/L胰蛋白酶、碘化丙啶(PI)均为美国Sigma公司产品,蒙诺(福辛普利)原药粉为美国施贵宝医药公司产品,鼠抗人α平滑肌肌动蛋白(αSMA)一抗IgG2a、荧光素FITC标记山羊抗鼠IgG二抗均为德国Calbiochem 公司产品。WZEF型净化工作台为苏州净化设备厂产品,HEPA CLASS100 3131型CO2培养箱为美国Termo Electron Corporation公司产品,ALTRA型流式细胞仪为美国BECKMAN COULTER公司产品,722型紫外分光光度计为上海光学仪器厂产品,TS100型倒置显微镜为日本Nikon公司产品,DG3022A型酶标仪为美国BIOMETRA产品。

  12培养条件采用RPMI1640培养基,临用前加体积分数20%新生牛血清、100 U/mL青霉素、100 μg/mL链霉素。消化液为25 g/L胰蛋白酶。人近端肾小管上皮细胞(HK2)由中山大学医学院肾脏病研究所余学清教授惠赠。

  13血清制备

  131尿毒症毒素血清(简称尿毒症血清)收集血清肌酐在707~1 685 μmol/L之间,近期内无明显全身及局部感染,未接受过血液透析治疗的患者血清40份,清晨空腹无菌静脉采血5 mL,室温静置2 h,无菌条件下将全部血清混匀、灭活、抽滤分装,-20 ℃保存。同期收集正常人血清,收集方法同上。

  132尿毒清胶囊含药血清(简称含药血清)3名正常志愿者口服治疗剂量尿毒

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