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尿毒清胶囊人含药血清抑制尿毒症毒素血清刺激的肾小管上皮细胞2增殖与转分化作用观察 |
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| 尿毒清胶囊人含药血清抑制尿毒症毒素血清刺激的肾小管上皮细胞2增殖与转分化作用观察 |
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清胶囊5 d后、最后1次服药后1 h均抽血30 mL，分离血清，并将含药血清置于56℃水浴箱中30 min灭活、抽滤分装，-20 ℃保存。
14实验分组所有血清浓度均是体积分数。为保持培养基中血清浓度均为20%，及根据预试验和文献[2]，设定尿毒症血清和尿毒清胶囊含药血清体积分数分别为5%和10%。实验分6组：(1)正常对照组: 10%胎牛血清加10%正常人血清加80 % RPMI1640培养液。(2)5%尿毒症血清组: 10%胎牛血清加5%尿毒症血清加5%正常人血清和80% RPMI1640培养液。(3)10%尿毒症血清组：10%胎牛血清加10%尿毒症血清和80% RPMI1640培养液。(4)5%尿毒清含药血清组：10%胎牛血清加5%尿毒症血清加5%含药血清和80% RPMI1640培养液。(5)蒙诺组：10%胎牛血清加5%尿毒症血清加5%正常人血清加蒙诺(浓度为10-6mmol/L)和80% RPMI1640培养液。(6)10%尿毒清含药血清组：5%胎牛血清加5%尿毒症血清加10%含药血清和80% RPMI1640培养液。
15人近端HK2增殖的检测[2]常规消化、收集HK2细胞，每孔按1×104个/mL接种于96孔培养板，置37℃、体积分数5%CO2培养箱内培养24 h，换成无血清培养液培养24 h使细胞处于静止期(G0期)，分别接种于6组培养液中培养，每种浓度设3个复孔，实验重复2次。继续培养48 h，每孔加20 μL(5 g/L)MTT溶液孵育4 h后弃除培养液，每孔滴加DMSO 100 μL，振荡待紫蓝色结晶完全溶解，在490 nm波长处，用酶标仪检测各孔光吸收(D) 值。
16流式细胞术(FCM)检测细胞周期及αSMA阳性细胞百分率各组(每组3瓶，实验重复2次)培养的细胞，继续培养48 h后，消化、收集细胞，每管细胞数为1×105个/mL，冷磷酸盐缓冲液(PBS)洗2次，体积分数75%冰乙醇固定，摇匀、吹打，4℃保存过夜，用于细胞周期检测。检测时离心，弃乙醇，PBS洗1次，加500 μL PI染液(含50 mg/L PI、1 g/L TritonX100、100 mg/L 的Rnase A)，4 ℃避光染色30 min，采用流式细胞仪检测。收集培养的细胞，用20 g 上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] 下一页 |
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