1.3.2 分组

　　将5 ～ 8只雌鼠的原代软骨细胞根据GH的作用分为时效组和量效组。时效组为GH作用后1 d， 2 d， 3 d， 4 d， 5 d， 6 d， 7 d(GH浓度为100 ng/mL)，同时每天设立无药对照组作为同步对照;量效组分为8组：对照组、10 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、200 ng/mL、500 ng/mL、1 000 ng/mL浓度GH干预组，各干预4 d。

　　1.3.3 MTT比色法测定生长激素对体外培养的软骨细胞增殖的影响

　　原代软骨细胞按每孔1 × 104个细胞的密度接种于96孔培养板，每组6复孔。加GH后，时效组每天收取1块96孔板进行显色，共7 d;量效组于GH作用后4 d取出，进行显色，每孔加入MTT(5 g/L) 20 μL并继续孵育4 h后弃培养基，加DMSO 150 μL/孔，置酶标仪上测定490 nm波长处吸光度值(A)。

　　1.3.4 免疫组化检测增殖核抗原的表达

　　采用细胞爬片技术，原代软骨细胞按每孔20 × 104个细胞的密度接种于24孔培养板，GH处理流程同MTT法。按标准SP检测试剂盒说明书进行免疫组化。增殖核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)抗体浓度为1：4 000，以胞核染为棕黄色为阳性细胞，
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