1.2 试剂
胎牛血清购自元享圣马公司,DMEM全培养液购自美国GIBCO公司,青霉素和链霉素购自华北制药厂,胰酶及EDTA购于SERVA公司及赛多利斯公司,噻唑蓝(MTT)购于北京欣源佳和生物科技有限公司,二甲基亚砜(DMSO)为上海华舜产品,一抗PTEN为小鼠单克隆抗体(Santa Cruz),一抗p53为小鼠单克隆抗体(上海博士德公司),一抗MDM2为小鼠单克隆抗体(Santa Cruz),二抗为辣根酶标记山羊抗兔IgG和辣根酶标记兔抗小鼠IgG(北京中杉金桥公司)。蛋白质分子量Marker(美国MBI公司),硝酸纤维素膜(美国Millipore公司);其余试剂丙烯酰胺、双丙烯酰胺、丽春红、十二烷基硫酸钠、β-巯基乙醇等均为国产分析纯。显影液、定影液(上海冠龙照相器材公司)。
1.3 细胞株
人宫颈癌细胞系SiHa细胞为HPV16表达阳性的人宫颈鳞癌细胞系(美国ATCC细胞库),北京大学人民医院干细胞中心妇科实验室魏丽惠教授惠赠。
1.4 药物
清毒栓由莪术、紫草、黄柏等组成,药材均购自北京同仁堂药店。将复方药物分别醇提(紫草)、油提(莪术)、水煎(黄柏),去渣浓缩,2 375 g原药材制作成560 mL药液,终浓度约为4.2 g/mL,高温消毒后于4 ℃冰箱保存。中药阳性对照药按保妇康栓组成比例(主要成分为莪术油及冰片)制成口服溶液。安达芬注射用重组人干扰素α-2b,安徽安科生物工程股份有限公司生产)。 以上药物均按人临床给药剂量的等效剂量10倍制成药物留用(200 g体重大鼠给药剂量=60 kg体重人给药剂量×0.018×10)。
2 实验方法
2.1 分组及给药
将大鼠随机分成4组:空白血清组给生理盐水、阳性药组(清毒栓组)、中药对照药组(保妇康组)、西药对照药组(安达芬组),每组10只。每日同一时间给空白血清组、消毒栓组、保妇康组灌胃,安达芬组用注射用水溶解后 上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] 下一页 |