夜。PBS,pH 7.5洗后,加1∶200稀释的二抗(鼠IgG-HRP),置37 ℃湿盒内孵育1.5 h,以DAB显色。阴性对照实验用PBS代替一抗。
2.4 检测指标
对细胞蛋白质斑点的印迹应用薄层层析扫描仪(Shimadu,日本)进行扫描并对免疫组织化学标本染色,应用图像分析仪(山富,中国)扫描各标本的免疫反应信号的灰度值。 3 统计学方法
采用SPSS11.5软件对以上数据进行统计学分析。所有数据用x±s表示,均值之间比较采用t检验。
4 结果
4.1 加味小柴胡汤对顺铂诱导BRL细胞核转录因子-kB、热休克蛋白70表达的影响
(见表1) 表1 各组细胞NF-kB、HSP70蛋白表达扫描灰度值(略)注:与空白组比较,**P<0.01;与顺铂组比较,△P<0.05,△△P<0.01
4.2 各组细胞免疫组化显色比较
细胞NF-kB经DAB染色呈棕黄色,正常组染色浅淡,顺铂组呈棕褐色,加味小柴胡汤大、小剂量组均明显较顺铂组浅淡,加味小柴胡汤大剂量组更为显著。提示顺铂处理组细胞NF-kB表达较正常组明显,应用加味小柴胡汤的实验组可下调NF-kB表达(见图1)。细胞HSP70染色呈棕色,正常组细胞染色较深,顺铂组较浅,加味小柴胡汤大、小剂量组染色均明显较顺铂组深。提示正常细胞HSP70表达明显,顺铂组HSP70表达降低,加味小柴胡汤大、小剂量组细胞HSP70表达明显上调(见图2)。
5 讨论 NF-kB是由B淋巴细胞核提取物中检测到的一种能与免疫球蛋白k轻链基因的增强子kB序列特异结合的蛋白因子,典型的NF-kB由p53和p65亚基组成。在静止状态下,NF-kB与I-kB抑制性蛋白结合处于未活化状态。当细胞受到炎性细胞因子、LPS等刺激时,I-kB激酶活化,I-kB从 上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] 下一页 |