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ion］Shenmai injection can ameliorate CC by regulating these genes that associated with immunity and metabolism. Whole genome expression profiling DNA microarray is a powerful tool for identification of differently expressed genes.
Key words: cancer cachexia; Shenmai injection; differentially expressed genes; DNA microarray
癌症引起的恶病质即癌性恶病病质(cancer cachexia, CC)，是指晚期癌症患者的体重下
降、厌食、虚弱、贫血、衰竭等体内代谢异常等组成的一组临床综合征，是癌症患者常见的并发症和死亡原因［1］。但由于对癌性恶病质发生机制仍不十分清楚，当前常规治疗尚不能明显改善恶病质患者的生存质量，且价格较昂贵，较大地增加了社会和家庭的经济负担。我们选用临床上广泛用于治疗中晚期肿瘤的中药制剂参麦注射液作为切入点，运用基因芯片技术，结合生物信息学手段，研究中药抗肿瘤恶病质的基因表达谱，从分子生物学水平探讨其药效作用的物质基础及作用机理。
1 材料与方法
1.1 动物与瘤株
健康雄性BALB/c小鼠48只，68周龄，体重2022g，由浙江中医药大学动物中心提供。结肠腺癌colon26细胞荷瘤鼠2只，由上海医药工业研究院药理室提供。
1.2 药品
参麦注射液由正大青春宝药业有限公司生产，国药准字：Z33020021，生产批号：0805152。
1.3 芯片材料和设备
Illumina激光共聚焦微珠芯片系统平台(BeadArray)、BeadSation扫描仪、BeadStudio分析软件、Mouse6 beadchip由上海博星基因芯片有限公司提供，产品目录号a21003。
1.4 动物实验方法
在超净工作台上剖取接种14d的皮下移植瘤，按50mg瘤组织:0.1ml无菌生理盐水的比例稀释后，无菌研磨器中制成单细胞悬液，调整到活瘤细胞浓度约为2×106个/ml，在每只小鼠右腋皮下注射 0.2ml瘤细胞悬液。第2d随机分为两组，参麦组M1为30只，空白对照组K2为18只。参麦组按32ml/kg.d予腹腔内注射参麦注射液，空白对照组予等量生理盐水腹腔注射，连续14d。接种后定时监测小鼠活动及毛色等一般状况的变化、小鼠体重、摄食量、饮水量，瘤体积等情况。第16d杀鼠取皮下移植瘤，迅速液氮冻存备用。
1.5 基因实验方法
1.5.1 芯片处理
用Unizol与组织分别充分混匀，迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的核酸酶，改良的一步法抽提肿瘤样本的总RNA［2］，采用Ambion Illumina RNA Amplification Kit线性扩增试剂盒对两样本进行线性扩增后得到纯化的cRNA，将样本与GEXHBY杂交液和无RNA酶的水混合，进入芯片杂交阶段。在杂交时掺入荧光标记SACy3（Fluorlink Cy3）对两样本进行标记，用StreptavidinCy3染色检测，然后清洗芯片,离心甩干。
1.5.2 检测与分析
用BeadSation对染色标记后的芯片进行扫描，获取芯片灰度扫描图。
1.5.3 数据处理
所有的数据均用Illumina BeadStudio Application软件进行分析，可以得到芯片上每个基因点的原始信号值，即所有有效重复点的前景信号值减去背景信号值的平均信号值（Avg_Signal），以及信号探测P值（Detection Pval），差异分值（Di 上一页 [1] [2] [3] [4] 下一页 |
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