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ffscore）等。差异基因的筛选标准为实验组与对照组其中任何一组中为有效基因，且实验组Diffscore值(即差异分值，体现一个探针在两种组织中的表达差异程度大于+20或小于-20，两值分别对应上调与下调，以及任意一个pvalue值小于0.01，即为差异基因。
1.6 统计学处理
应用SPSS 13.0统计软件包进行统计学处理，数据用均数±标准差（x±s）表示，利用t检验、方差分析等统计方法分析动物实验部分数据。以P<0.05为差异有统计学意义。 2 结果
2.1 参麦注射液对小鼠癌症恶病质的作用
皮下接种第4d，荷瘤小鼠右侧腋下开始可以触及小结节，至第9d，全部小鼠饮食量明显下降，进入典型恶病质期，其中以空白对照组症状特别明显。参麦组摄食量和饮水量下降速度明显低于空白对照组，第15d比第5d两组摄食量和饮水量下降速度分别为24.7%、52.5%及40.2%、45.9%(P<0.01)；第16d参麦组去瘤体重明显重于空白对照组（P<0.0
1），但两组间瘤体积比较无显著差异(P>0.05)，见表1。表1 参麦注射液对恶病质小鼠观察指标的影响(略)
2.2 总RNA提取结果
检测总RNA质量, 通过BioAnalyzer进行分析鉴定，需要有清晰的28s、18s和5s rRNA条带，同时28S和18S比值在2∶1以上，70℃水浴保温1h后的电泳图谱与水浴保温前的图谱无明显差异。电泳结果证实已抽提到高纯度的总RNA，质量完好，非降解，见图1。
2.3 基因表达谱
以Cy3荧光标记后，为表达谱芯片荧光扫描图像，结果分别见图2、3所示。图1 电泳图图2 空白组荧光标记扫描图图3 参麦组荧光标记扫描图2.4 差异表达的基因结果 运用Illunima激光共聚焦微珠芯片系统筛选参麦注射液治疗BALB/c小鼠癌症恶病质与空白对照组的差异表达的基因，共得到68条差异表达基因，信息来源为MEMBORefseq，绝大多数对应小鼠肌cDNA文库（cDNA library）。其中56条呈上调趋势，12条呈下调趋势。列举其中部分差异显著的5条差异基因列表，见表2。表2 参麦注射液基因芯片部分差异表达（略）
3 讨论
现代中医学研究提示：发生癌症恶病质后气阴两虚型明显增多（约占55.73％），是恶病质的主要证型［3］。本实验所使用的药物参麦注射液具有益气固脱、养阴生津等功效，临床上常用于治疗中晚期肿瘤，有较好的疗效［4］。我们尝试用基因芯片工具在基因水平初步提示中医药干预癌症恶病质的机制，就用生物信息学对差异表达基因进行分析，找出中药发生作用的靶基因。
本动物实验成功地建立癌症恶病质小鼠模型，并证实用参麦注射液进行干预后，荷C26鼠癌症恶病质状态得到改善，相对于空白对照组，能明显增加恶病质小鼠的摄食量和饮水量，减缓小鼠体重的下降，因此我们认为参麦注射液在临床癌症恶病质的姑息治疗中将有广阔的应用前景，但其作用机制值得进一步研究。
通过基因实验部分的结果分析发现，在癌症恶病质的发生、发展过程中有多个基因的参与，根据这些基因的相关文献查询，可以推断恶病质的相关机制和参麦注射液的作用靶点及机制。
本实验中参麦组与空白组对比得到的68条差异表达基因，其中多数是小鼠肌cDNA文库中的基因片段，另外包括代谢相关基因、免疫相关基因和极少量肿瘤相关基因。
其中比如：①TNNT3（fast skeletal muscle troponin T3）快反应骨骼肌肌钙蛋白T3基因［5］。此基因在骨骼肌中特异性表达，与肌肉和肌腱形成相关，其编码的肌钙蛋白（TnT）参与骨骼肌收缩。有文献报道人类和小鼠的快反应骨骼肌TnT在氨基酸的一级结构上约有93%的同源性。TnT的主要功能是参与Tn多聚体的形成并且结合原肌球蛋白（T 上一页 [1] [2] [3] [4] 下一页 |
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