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【摘要】 ［目的］观察祛痰散瘀软坚中药对肺纤维化大鼠肺组织病理形态学及HYP（羟脯氨酸）含量的影响。［方法］大鼠气管内注入博莱霉素建立肺纤维化模型。随机分为正常对照组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组和强的松组。造模次日每天按剂量给药，分别在第7、28天分批次处死动物，制作病理标本，观察肺组织病理形态学变化及计算肺组织HYP含量。［结果］模型组7d时肺泡腔内大量炎性细胞浸润，可见少量成纤维细胞，I型细胞受损，II型细胞明显增生；28d时肺泡炎减轻，肺间质和胸膜层胶原纤维明显增多。各治疗组7d时炎性细胞浸润较模型组少，肺组织结构较模型组完整，28d时肺泡间隔增厚及间质内成纤维细胞增殖较模型组减轻，电镜下观察亦如此。28d时各治疗组的肺组织HYP含量均低于模型组（P<0.01或P<0.05）。［结论］除痰散瘀软坚中药能有效抑制博莱霉素引起的肺纤维化形成。
【关键词】 肺纤维化 羟脯氨酸 祛痰 散瘀 软坚
肺纤维化是一种以两肺间质纤维化伴蜂窝状改变为特征的疾病。近年来中药防治肺纤维化的研究成为肺科学界关注的焦点，以期寻找更安全、有效的药物治疗本病。本研究采用博莱霉素A5(BLMA5)建立大鼠肺纤维化模型，观察祛痰、散瘀软坚中药对肺纤维化大鼠病理形态学和肺组织羟脯氨酸(HYP)含量的影响，探讨其对肺纤维化的治疗作用。
1 材料与方法
1.1 动物、药品及主要试剂 SD大鼠80只，体重，由浙江中医药大学动物实验中心提供。批号：ScxK（沪）20040003。①复方中药由苏木12g，皂角刺9g，鬼见羽15g等组成，按比例常规水煎，60%醇沉后浓缩为含生药1.82g/ml。所用中药购于浙江省中医院中药房，由中药制剂室制备。②博莱霉素A5由天津太和制药有限公司生产，批号 040310。③强的松（泼尼松）片剂由浙江仙居制药厂生产，批号040406。④对二氨基苯甲酸由天津化学试剂研究所提供，批号020801。⑤ L羟脯氨酸标准品由中国科学院上海生物化学厂提供，批号011207。
1.2 动物造模 80只健康SD大鼠，随机选取16只为正常对照组（Ⅰ组），余64只为模型动物，参照文献方法［2］将所有大鼠用硫喷妥钠（剂量为3mg/100g体重）腹腔麻醉后，仰卧位固定于手术台上，暴露喉头，额镜直视下趁动物吸气瞬间，将与注射器相连的7号钝头腰穿针插入气管内，模型动物注入BLMA5（剂量为2ml/kg体重），并注入0.2ml空气，完毕后迅速将动物直立、顺时针旋转，动物清醒后随意进食。
1.3 分组与给药 造模结束后，随机将64只模型动物分为模型组、中药高剂量组（Ⅳ组）、中药低剂量组、强的松组，每组各16只。正常对照组与模型组每天灌服无菌生理盐水1ml/100g体重，1日2次；强的松组每天给予强的松0.6mg/100g体重灌胃（使用时将强的松片剂碾碎，加2ml无菌生理盐水稀释），1日1次，顿服；中药高剂量组每天给予中药1.1ml/100g体重灌胃，1日2次；低剂量组每天给予中药0.55ml/100g体重灌胃，灌胃时加适量生理盐水，稀释至与高剂量组相同的灌胃量，1日2次；以上均喂服28d。
1.4 标本采集 分别于第7、28天放血，分批处死动物（每批每组8只）后，迅速开胸，取出心肺，制作病理标本和进行生化检查。①分离出肺，夹闭右主支气管，10%福尔马林溶液经左支气管灌注固定30min后，投入10%福尔马林溶液中固定24h，石蜡包埋，常规切片，分别行HE及Masson染色，观察肺泡炎及肺纤维化程序。②迅速从右肺切1mm×1mm×1mm组织两块，以冷却2.5%戊二醛进行固定8h后，PBS（PH7.4、0.2mol/L磷酸缓冲液）冲洗，钌红水固定24h，常规切片，进行电镜观察。
1.5 形态学分级 根据Szapiel［3］等方法确定肺泡炎及肺纤维化的程度。利用HE染色的病理切片将肺泡炎分为4级：0级：无肺泡炎（—）；1级：轻度肺泡炎（+），肺泡膈因细胞浸润增宽，病变范围局限在全肺的20%以下；2级：中度肺泡炎（++），病变范围占全肺的20%～50%；3级：重度肺泡炎（+++），呈弥漫性分布，病变范围大于50%。利用Masson染色的切片将肺间质纤维化分为4级：0级：无间质纤维化（—）；1级：轻度间质纤维化（+），病变范围局限在全肺的2 [1] [2] [3] 下一页 |
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