| 大肠癌组织RhoE、p53的表达及临床意义 |
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1.1 材料
随机抽取重庆市肿瘤医院存档的1996年到2006年期间手术切除和病理证实的大肠癌标本48例，其中乳头状腺癌18例，管状腺癌22例，粘液腺癌8例；高分化腺癌26例，中分化腺癌16例，低分化腺癌6例；有淋巴结转移30例，无淋巴结转移18例。Dukes分期：A期和B期共32例，C期与D期共16例，术前均未接受化疗和放疗。另选正常大肠组织30例作为对照。
1.2 试剂
鼠抗人RhoE多克隆抗体为中科院武汉分院惠赠，鼠抗人p53单克隆抗体、超敏SP试剂盒和DAB显色试剂盒购于北京中杉生物技术有限公司。
1.3 方法
蜡块切片（厚4 μm）后，采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接(SP)染色法检测RhoE、p53蛋白的表达。用PBS代替一抗作阴性对照，以已知阳性片作阳性对照。三种蛋白均采用37 ℃孵育1 h，再放入4 ℃冰箱过夜，DAB显色，苏木素复染。
1.4 结果判断
RhoE阳性反应为淡黄至棕黄色颗粒，位于胞浆，p53蛋白阳性反应为棕黄至棕褐色颗粒，位于胞核。在此基础上，参照文献［12］评分方法，首先将染色强度评为1～4分，再按阳性细胞所占的百分比评为0～4分。染色强度与阳性细胞的分值相加，大于等于3分为阳性(+)，每张切片选择有代表性的区域，在400倍视野下计数，共计5个视野，取平均值。
1.5 统计学方法
所得数据用阳性率(％)表示，采用SPSS11.5软件进行卡方检验和Pearson相关分析。P＜0.05为统计学相差显著。
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