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PN1CD36的构建与鉴定 重组质粒pEGFPN1CD36经XhoⅠ、 KpnⅠ双酶切后, 出现2条片段, 即1 425 bp和4 695 bp, 酶切片段大小与预期值相符(图2)。DNA测序结果亦显示, 已成功将CD36基因片段插入pEGFPN1质粒中, 其编码序列与GenBank的大鼠CD36基因的序列相符。
图2 重组质粒pEGFPN1CD36的双酶切鉴定（略）
M: DNA marker; 1: 重组质粒 pEGFPN1CD36; 2: XhoⅠ和KpnⅠ双酶切的重组质粒.
2.3 荧光镜检pEGFPN1CD36质粒在293T细胞中的表达 转染48 h后, 荧光显微镜下观察, 在转染空质粒pEGFPN1的293T细胞中可见绿色荧光在胞质表达(图3A), 在转染重组质粒pEGFPN1CD36的293T细胞中可见绿色荧光在胞膜表达(图3B)。
2.4 Western blot分析 Western blot结果显示, 在转染重组质粒pEGFPN1CD36的293T细胞中检测到蛋白Mr大小为115 000的蛋白条带, 而在转染空质粒的293T细胞中未检测到CD36GFP融合蛋白 (图4)。
图3 pEGFPN1CD36 在293T细胞中表达的荧光检测（×200）（略）
A: 293T细胞/pEGFPN1; B: 293T细胞/pEGFPN1CD36.
图4 转染的293T细胞中CD36GFP融合蛋白的表达（略）
1: 293T细胞/pEGFPN1; 2: 293T细胞/pEGFPN1CD36.
3 讨论
肺纤维化是一组由多种病因所引起的肺破坏性疾病, 但目前对肺纤维化发病的分子机制还不十分明了。国内外研究表明, 细胞因子在纤维化性疾病的发生发展过程中起着非常重要的作用, 特 上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] 下一页 |
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