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作者：石洁, 惠玲*, 张煦, 王晓辉, 杨金升, 吕同德, 赵治华, 哈小琴
【摘要】 目的: 构建钙整合素结合蛋白( calciumand integrinbinding protein, CIB)的原核表达载体, 制备小鼠抗人CIB的多克隆抗体并探讨其亚细胞定位。方法: 采用RTPCR方法从人脑组织扩增CIB的cDNA片段, 利用DNA重组技术构建原核表达载体pET32aCIB, 转入BL21(DE3)中, 以IPTG诱导BL21(DE3)表达CIB融合蛋白, SDSPAGE鉴定融合蛋白CIB的表达。用含CIB融合蛋白的聚丙烯酰胺凝胶颗粒为抗原免疫小鼠制备抗血清, 抗血清分别经Protein G、 抗原亲和层析后用Western blot及免疫组化方法进行鉴定。结果: 通过重组表达获得CIB抗原蛋白, 免疫小鼠并纯化抗血清得到特异性的抗CIB抗体, 该抗体能检测细胞内源性CIB蛋白的表达; 同时免疫组化结果显示: CIB在SHG44、 Hhu7细胞株中主要定位于细胞质。结论: 成功克隆CIB基因并制备了特异性的小鼠抗人的CIB多克隆抗体, 对进一步研究CIB的功能奠定了基础。
【关键词】 CIB; 基因重组; 融合表达; 多克隆抗体; 亚细胞定位
［Abstract］ AIM: To construct the prokaryotic expression vector pET32aCIB, prepare the specific polyclonal antibody against CIB and study the subcellular localization of CIB. METHODS: CIB was amplified by RTPCR from human brain tissue and cloned into prokaryotic expression vect [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] [8] 下一页 |
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