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r further research into the function of CIB.
［Keywords］CIB; gene recombination; fusion expression; polyclonal antibody; subcellular localization
钙整合素结合蛋白( calciumand integrinbinding protein, CIB) 是1998年研究人员用integrin aIIb subunit为诱饵通过酵母双杂交得到的一个新基因, 对该蛋白的序列结构分析表明, 它含有4个EFhand结构域, 其中EFhand3、 4位于C端, 与钙离子有很高的亲和性［1］。它的许多特性与另一含有EFhand结构域的恢复蛋白家族的神经钙感受器蛋白(NSC)相似［2］。与NSC蛋白不同的是CIB不只在神经元表达, 它在机体的许多组织如脑、 心脏、 肺等均有表达。CIB也是3个重要的钙结合蛋白之一, 与其他2个已知的参与多种蛋白调节的钙结合蛋白钙调磷酸酶B(calcineurinB, CnB)及钙调素(calmodulin, CaM)有很高的同源性, 研究表明CIB也与这个两钙调蛋白一样, 是一种钙离子感受器, 它与钙离子结合后会引起CIB蛋白构象的改变, 使它能与其他的蛋白因子结合, 从而影响细胞的功能。表达并制备其抗体对于基因的功能研究将起重要作用, 如免疫组化、 蛋白质相互作用的鉴定等许多方面工作的开展都需要有特异的抗体作为辅助。因此, 我们构建了CIB的原核表达载体, 进行了原核表达和纯化, 并免疫小鼠获得抗体, 为进一步研究CIB的功能提供
2.2 CIB的原核表达及目的蛋白的纯化 将构建好的原核表达载体转入BL21(DE3)大肠杆菌中, 用IPTG进行诱导表达。120 g/L SDSPAGE电泳结果可见与理论Mr 42×103大小相符的目的蛋白带, 将切下的含目的蛋白的凝胶块用PBS(pH7.2)4℃溶解过夜后, 离心收集上清, 用120 g/L SDSPAGE对纯化效果进行鉴定。纯化后的CIB蛋白几乎不含杂蛋白, 纯化效果理想(图2)。 上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] [8] 下一页 |
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