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钙整合素结合蛋白CIB的原核表达及多克隆抗体的制备与亚细胞定位           
钙整合素结合蛋白CIB的原核表达及多克隆抗体的制备与亚细胞定位

  图2  CIB的原核表达及目的蛋白的纯化(略)

  Fig  2  Analysis of CIB recombinants protein and Purification of CIB protein by 120 g/L SDSPAGE

  M:  Protein marker;  1:  CIB protein after purification;  2:  pET32CIB/BL21 induced by IPTG;  3:  pET32CIB/BL21 uninduced by IPTG;  4:  pET32/BL21  induced by IPTG.

  2.3  多克隆抗体的制备  SDSPAGE电泳分析表明, 经过Protein G和CIB蛋白亲和柱两步纯化后, 可见清晰的抗体重链和轻链条带, 表明抗CIB多克隆抗体的纯化是成功的(图3)。

  2.4  Western  blot特异性检测结果  为了验证CIB抗体能否特异性的与内源性CIB蛋白结合, 本实验以SHG44的细胞裂解液为研究对象, 分别使用经Protein G和CIB蛋白亲和层析纯化后的多克隆抗体进行Western blot检测, 结果表明, 经Protein G纯化的抗血清可以检测到多条蛋白条带, 特异性较差, 经过CIB蛋白纯化的多抗能够与内源性的蛋白结合, 特异性增高, 仅在Mr 22 000左右处可见1条明显的蛋白条带, 证明抗CIB多克隆抗体具有较好的特异性(图4)。

  图3  SDSPAGE电泳检测抗体的纯化(略)

  Fig 3  SDSPAGE analysis of the purified antibody

  1:  Antibody purified by protein G;  2:  Antibody purified by CIB.

  图4  W

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