图2 CIB的原核表达及目的蛋白的纯化(略)
Fig 2 Analysis of CIB recombinants protein and Purification of CIB protein by 120 g/L SDSPAGE
M: Protein marker; 1: CIB protein after purification; 2: pET32CIB/BL21 induced by IPTG; 3: pET32CIB/BL21 uninduced by IPTG; 4: pET32/BL21 induced by IPTG.
2.3 多克隆抗体的制备 SDSPAGE电泳分析表明, 经过Protein G和CIB蛋白亲和柱两步纯化后, 可见清晰的抗体重链和轻链条带, 表明抗CIB多克隆抗体的纯化是成功的(图3)。
2.4 Western blot特异性检测结果 为了验证CIB抗体能否特异性的与内源性CIB蛋白结合, 本实验以SHG44的细胞裂解液为研究对象, 分别使用经Protein G和CIB蛋白亲和层析纯化后的多克隆抗体进行Western blot检测, 结果表明, 经Protein G纯化的抗血清可以检测到多条蛋白条带, 特异性较差, 经过CIB蛋白纯化的多抗能够与内源性的蛋白结合, 特异性增高, 仅在Mr 22 000左右处可见1条明显的蛋白条带, 证明抗CIB多克隆抗体具有较好的特异性(图4)。 图3 SDSPAGE电泳检测抗体的纯化(略)
Fig 3 SDSPAGE analysis of the purified antibody
1: Antibody purified by protein G; 2: Antibody purified by CIB.
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