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血浆同型半胱氨酸及其相关酶基因多态性与Alzheimer病的关系 |
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| 血浆同型半胱氨酸及其相关酶基因多态性与Alzheimer病的关系 |
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nbsp; 1.2.2 标本基因组DNA的制备 抽取静脉血2ml，EDTA抗凝，采用低渗溶血，常规酚-氯仿法提取白细胞基因组DNA。
1.2.3 引物的设计及合成 MTHFR 基因片段扩增引物为：上游5－AGGACGGTGCGGTGAGAGTG-3，下游5-TGAAGGAGAAGGTGTCTGCGG-3，由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。
1.2.4 PCR扩增反应 反应体系50μl，引物各10pmol，10mMdNTP 1μl，10×buffer 5μl， DNA3μl，2.5u Taq 聚合酶，反应条件：预变性94℃5min，（94℃30s、58℃40s、72℃1min） 31cycles， 72℃延伸10min。
1.2.5 RFLP分析 （1）MTHFR基因C677T PCR 产物6μl，Hinf I内切酶10u，10×buffer 2μl，去离子水11μl，混匀后37℃恒温箱内消化过夜。（2）3％琼脂糖凝胶电泳分析酶切产物：取酶切产物10μl加入3％琼脂糖凝胶负极端的加样孔内，以溴酚兰为指示剂，溴化乙锭为染色剂，在170V电压下电泳1h15min，在紫外线灯下观察带型。 1.2.6 MTHFR基因型的确定 MTHFR基因片段PCR扩增产物长度为198bp,经Hinf I内切酶酶切后从突变部位裂解成为175bp、23bp两个片段。该基因3％琼脂糖凝胶电泳图谱见图1。
1.3 统计学处理 全部数据采用SPSS12.0软件进行统计学处理。t检验比较两组Hcy水平；吻合度检验确定MTHFR基因型分布是否符合Hardy- Weinberg平衡定律，χ2检验比较基因型、等位基因分布频率。
2 结果
2.1 AD组与对照组血 上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] 下一页 |
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