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温度和培养基在申克孢子丝菌酵母相转化中的作用研究           
温度和培养基在申克孢子丝菌酵母相转化中的作用研究
g羊血BHI及5 mg/kg GSBHI 5种培养基上,每种培养基接种5个平皿,分别置于25、35、36、37及38 ℃含5%的体积分数为CO2恒温温箱中培养。观察菌落生长情况,每5 d传代1次,连续传代3次。

  在所有平皿上的菌株传代3次生长至第5天时,用接种环挑取少量菌落,置于灭菌载玻片上,滴加乳酸酚棉兰或酚红染色后,置于光学显微镜下观察菌落形态。参照文献[7]计算每个平板上菌株的酵母细胞转化率,转化率 > 10%为酵母相转化成功。

  1.5 统计学分析

  利用精确概率法对所有菌株在不同温度和培养基下转化率的差异进行统计学分析,统计软件使用SPSS 16.0, P < 0.05为差异有统计学意义。

  2 结 果

  2.1 菌株活化

  4 株申克孢子丝菌经活化后均生长良好,形成棕褐色有皱褶的典型菌落。

  2.2 酵母相转化

  2.2.1 申克孢子丝菌在不同温度的酵母相转化

  在25 ℃的培养条件下,5种培养基上生长的菌株均表现为明显的丝状菌落,不能转化为酵母相。在38 ℃时,25%培养基平皿上的菌株发生了酵母相转化(为菌株BMU00471,其余菌株均不能生长)。35 ℃和37 ℃时分别有60%(12/20)和85%(17/20)培养基平皿上的菌株发生了酵母相转化。36 ℃时仅有45%(9/20)培养基平皿上的菌株发生了酵母相转化(表1)。菌株在各温度下的转化率的差异具有统计学意义(P < 0.001)。在光镜下计数不同温度时50 mg/kg羊血BHI培养基上生长的4株申克孢子丝菌酵母细胞的转化率,发现所有菌株在35 ℃和37 ℃的转化率均明显高于36 ℃和38 ℃,对于菌株BMU00471,其在35 ℃和37 ℃的转化率均可达到90%;38 ℃时所有菌株的转化率最低,菌株SUMS0382、SUMS0383、BMU02035均低于10%(图1)。不同温度下的酵母相菌落均在转种后的第2天开始出现,在第2 ~ 4天生长迅速,在第5天生长变得缓慢。在含5%去纤维蛋白羊血清的BHI培养基上,菌株BMU00471在35、36、37和38 ℃均可以转化为酵母相。在35

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