| 入肝门静脉动脉化加门腔分流术对大鼠肝脏再生的影响 |
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流式细胞术FCM检测。使用FACS Calibur 型流式细胞仪(美国Becton Dickinson公司)，用碘化丙啶(PI)定量DNA荧光染色法(美国BD CycletestTM Plus DNA Reagent Kit)，鸡红细胞做标准样品，调整仪器的CV值在5%以内，激光功率为200 W，激发光波长488 nm，滤光片波长620 nm，测定细胞荧光信号。每份样品检测20 000个细胞，计数活细胞总数，S期(DNA合成期)肝细胞数，求出每例样本S期肝细胞百分比例 = S期肝细胞/活细胞总数 × 100%。
1.3.3 肝细胞PCNA免疫组化检测
3组同样分别于术中取1 cm3大小肝组织，术后6、24、48、72 h和7 d处死时留取肝脏标本，均中性甲醛溶液固定、石蜡包埋。连续切片，厚4 μm。切片常规脱蜡后蒸馏水冲洗5 min;用300 mL/L过氧化氢孵育30 min以抑制内源性过氧化物酶;用10 mL/L正常小牛血清孵育20 min封闭内源性过氧化酶;加一抗(美国 Dako公司，PCNA PC10 MAb)稀释液(1 ∶ 50)4 ℃湿盒内室温孵育过夜，PBS冲洗3次 × 5 min;加生物素标记的二抗(福州迈新公司，KIT-0100M，Ultra Sensitive S-P Mouse)室温孵育30 min;加ABC复合物室温作用30 min，PBS彻底冲洗;DAB显色液(福州迈新，DAB-2031加强型 DAB Plus Kit)染色2 ～ 10 min，苏木素轻度复染;系列酒精脱水，二甲苯透明;树胶封片观察。由两名病理医师双盲法分别观察免疫组织化学染色结果，在高倍镜下(10 × 40)随机观察4个视野共1 000个细胞，核内有棕黄色颗粒沉积者为阳性细胞，取其两人计数结果的平均值，用百分率表示PCNA阳性率。计算方法：PCNA阳性表达细胞比例 = 阳性细胞数/观察的细胞总数 × 100%。
1.4 统计学处理
应用SPSS 13.0版软件，数据以x ± s表示，两组间计量资料统计采用t检验， 3组间均数比较先行单因素方差分析后再行LSD-t (least significant difference-t)检验，取?琢 = 0.05。 上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] [8] [9] 下一页 |
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