| 液相芯片技术的原理与应用进展 |
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ren综合征患者血浆中可能与细胞死亡有关的25种细胞因子水平，发现某些细胞因子水平在患者与健康人之间差异显著，作者认为能同时检测多种细胞因子的液相芯片技术可成功用于诊断Sjogren综合征及个性化抗细胞因子治疗。
与传统ELISA方法相比，液相芯片除了能同时检测细胞培养上清、血清、血浆、全血、组织匀浆液、泪液、脑脊液甚至新生儿干血斑等标本中的多种细胞因子，一次检测即可确定Th1/Th2特异性免疫应答，能为了解免疫应答中的细胞因子分泌情况提供更为全面的信息外，还至少具有以下优点：①比ELISA灵敏度更高，标准曲线在更低的浓度仍能保持线性：这是因为液相芯片与ELISA依靠酶放大作用的间接检测相比，荧光读值更直接、稳定、灵敏；此外，液相芯片检测中洗涤更彻底，微球表面积小，减少了非特异性结合；而且交联抗体是共价结合于微球上，这不同于ELISA依靠疏水作用通过物理吸附与固相载体结合。②比ELISA更准确：液相芯片最后报告的荧光值为100个微球荧光检测结果的中值，相当于重复进行了100次检测。③更经济：一次可对10～20余种细胞因子进行定量分析，检测单种细胞因子的试剂用量显著降低，样本需要量少（最多仅需100 μl），而ELISA检测同样数目的细胞因子需要数毫升样本。据估算，同时检测8种人细胞因子的费用仅为ELISA的1/17，样品用量仅为后者的1/20，因此大大节省了人力、时间和费用。
3.2 检测SNP
单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP) 是指在基因组水平上由于单个核苷酸改变所引起的DNA序列多态性。它是人类可遗传的变异中最常见的一种，占所有已知遗传多态性的90%以上。SNP在人类基因组中广泛存在，平均每500～1 000个碱基对中就有1个，估计其总数可达300万个甚至更多。随着人类基因组计划的完成，基因组多态性研究，尤其是SNP检测，已经成为一个重要的研究热点。
利用液相芯片技术进行SNP分析的研究报道已有很多，在此平台上可应用多种不同的SNP基因型分析方法，如单碱基链延伸法（single base chain extension，SBCE）、等位基因特异性引物延伸法(allelespecific primer extension，ASPE)、寡核苷酸连接法、直接杂交法、竞争杂交法等。
采用液相芯片技术进行SNP分析，96孔板上每孔可检测50种SNP，仪器分析96个孔的数据只需1小时，这样每台仪器每天（8
h）可完成30 000个以上基因型的检测，每个SNP的平均检测费用据估算不到＄0.20（不包含PCR费用），并且主要取决于SNP数目、联检项目数量、标本数量、人力和试剂费用等因素。因此，用液相芯片进行SNP分析比DNA测序或者基因芯片操作简便、快速、高效、准确、重复性好、通量高、费用低，而且单管反应即可检测多种SNP，在研究SNP与疾病（心血管疾病、肥胖、肿瘤等）发生、法医鉴定等方面具有显著的优势和广阔的应用前景。Nishihama［4］ 为评价有或无冠心病常见危险因素（高血压、高血脂、糖尿病）者基因多态性与心肌梗塞之间的关联，采用液相芯片法（PCR与序列特异性寡核苷酸探针杂交）确定了3 483人（1 192名心肌梗塞患者、2 291名对照）137个候选基因的164种多态性的基因型，发现9种不同的多态性与心肌梗塞显著相关（P<0.005），冠心病常见危险因素不同者其心肌梗塞相关基因多态性也不同。
目前也已推出用于SNP检测的液相芯片试剂盒，如Tm Bioscience公司有用于临床同时检测因子V Leiden突变（G1691A）、凝血酶原（G 20 210 A）、MTHFR C677T和MTHFR A1 298 C突变、检测导致囊性纤维化的CFTR基因突变的遗传性疾病检测试剂盒（囊性纤维化检测试剂盒是被FDA批准的首个人类疾病多重基因分型体外诊断试剂），很适合用于高通量临床基因分型。Marligen Biosciences公司的YSNP鉴定系统和线粒体DNA筛选系统可分别检测人Y染色体上的96种SNP和人线粒体DNA超变区的30种SNP。
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