|
病原体和诊断感染性疾病
应用液相芯片技术不仅可用免疫学方法检测机体感染病原体（包括病毒、细菌、真菌、寄生虫等）后产生的血清抗体，或直接检测病原体抗原，也可在基因水平上检测病原体的核酸，其用途十分广泛，如血清学诊断、病原体分型、疫苗效力评价、食品安全、环境监测、生物反恐等。这方面的研究报道很多，一般都将液相芯片和传统的金标准ELISA法进行检测结果比较。
3.3.1 血清学诊断 检测抗病原体特异性抗体时一般采用间接法，即将病原体抗原（蛋白或多糖）交联在微球上，与样品中的相应抗体结合后，加入藻红蛋白标记的抗人IgG或IgM.
Lukacs［5］ 制备了抗原交联微球，不需洗涤步骤即可同时检测新生儿干血斑标本中的乙肝表面抗原、HIV1 p24、gp41抗体和丙型肝炎病毒NS3、NS4、核心抗原的抗体。Martins［6］在微球上交联A组链球菌的9种不同抗原（包括2种非特异性细胞外抗原、3种特异性抗原和4种与急性风湿热有关的组织抗原），定量分析患者感染A组链球菌后血清中的抗体反应。该方法仅需5 μl血清，90 min即完成分析，对链球菌溶血素O（SLO）、DNaseB的测定结果与传统方法100％相符，而且特异、灵敏，可检测浓度1 ng/ml以下的抗体。Kuller［7］直接在微球上交联全病毒抗原，用液相芯片技术检测恒河猴血浆中的抗病毒IgG抗体，以筛选未感染猴D型逆转录病毒、猴T淋巴细胞趋向性病毒、猴疱疹病毒1型、猴免疫缺陷病毒的SPF动物，并与ELISA比较检测灵敏性、特异性、交叉反应性和通量。结果表明，这两种方法的检测结果高度相关（相关系数 r 为0.98～0.99），液相芯片灵敏度更高，却又不影响其特异性（达100％），不产生交叉反应，而且由于该方法的假阳性率低，因而可减少需用Western确证的血清样品数量。在时间方面，用液相芯片同时检测样品中抗4种病毒抗体所需的时间与ELISA检测抗单种病毒抗体所需时间相等。因此液相芯片在灵敏度、稳定性、通量等检测性能方面较ELISA更胜一筹。此外还有用液相芯片技术检测鼠疫杆菌、炭疽杆菌、EB病毒、西尼罗河病毒、流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒、弓形体、小隐孢子虫等病原体特异性抗体的报道。
3.3.2 病原体的检测和分型 人乳头瘤病毒（HPV）可导致宫颈癌，宫颈癌是妇女的第二大肿瘤，每年死亡人数近250 000人。HPV感染后患宫颈癌的危险性与病毒型别有关。Schmitt［8］采用液相芯片技术实现了在一个反应中同时对22种高危型和低危型生殖道HPV的基因分型，它是通过PCR以及与交联在微球上的型特异性探针杂交而完成。其批间变异系数<10％，最低检测限为100～800 pg PCR产物。该方法与反向线点杂交法对94个临床标本的检测结果相符，而灵敏度更高。Wallac［9］也通过类似方法同时高通量、快速检测45种生殖道HPV的基因型。由于液相芯片法对检测HPV混合感染非常有效，因此十分适合用于常规诊断、大规模流行病学调查、肿瘤筛查、监测治疗干预效果及疫苗试验中评价疫苗效果等。Borucki［10］在液相芯片技术中引入了DNA树形大分子（dendrimer）信号放大方法，只使用基因组DNA即对单核细胞增生性李斯特菌菌株进行了血清型鉴定，该方法不需PCR扩增，而且与多重PCR不同的是，它易于通过设计更多针对不同区域的探针序列而提高分型的分辨率。 Straub［11］先采取自动化的免疫磁珠分离技术从样品中分离大肠杆菌O157:H7、沙门氏菌、志贺氏菌，然后通过标记引物进行多重PCR，最后用液相基因芯片同时检测上述三种细菌。结果表明其检测限为100个菌/种。
用液相芯片技术进行病原体基因检测和分型鉴定可将核酸杂
交分析的特异性、可靠性及液相芯片技术的快速、灵敏性结合起来，PCR 1 h后即可完成鉴定，能精确区分相差一个核苷酸的不同种属细菌，灵敏度达到101～103基因组拷贝或<1 pg DNA。
3.3.3 疫苗效力评价 在用于疫苗临床试验，尤其是评价多价疫苗接种后的免疫应答反应方面，液相芯片技术非常适合同时测定同一血清 上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] [8] [9] 下一页 |
用户登录 
新用户注册 