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而CK2全酶对两者的Km值相似，说明单独CK2α′亚基对ATP的亲和力大于对GTP，CK2全酶对两者的亲和力相似. 而CK2全酶对ATP和GTP的Km值均小于单独CK2α′亚基，说明全酶对ATP或GTP的亲和力明显强于单独CK2α′亚基对ATP或GTP的亲和力，且其活性较单独CK2α′亚基均有提高. 单独CK2α′亚基或CK2全酶对ATP的Vmax值均大于对GTP的Vmax值. 表2重组小鼠CK2全酶的性质鉴定
3讨论
蛋白激酶CK2是第一个被发现的蛋白激酶，被认为是21世纪的蛋白激酶和挑战常规的蛋白激酶［5］，但CK2在体内的真正作用及其机制至今仍是个谜. 目前获得小鼠CK2α′蛋白存在困难，又缺乏商品化的小鼠CK2α′抗体. 因此，表达纯化重组小鼠CK2α′蛋白为进一步系统研究重组小鼠CK2全酶(α2β2，α′2β2 或αα′β2)的一些基本性质,以及外体筛选以CK2α′为靶点的药物和制备其功能封闭性抗体，阐明该酶的作用机制具有十分重要意义.
陈小文等［6-7］的研究初选用原核表达载体pT77,已成功地克隆表达纯化了人CK2α，β亚基和小鼠CK2α，β，而利用此载体目前还未能获得过度表达的人和小鼠二种CK2α′亚基，这可能与人和小鼠二种CK2α′亚基cDNA的5′端GC含量比例过高，其mRNA容易形成二级结构有关，从而影响其直接翻译表达. GST融合表达载体pGEX，带有非常强的T7启动子和终止子，其本身表达1个Mr 26 ku GST蛋白，该系统可以克服转录
与转录后水平对外源基因表达可能带来的不利影响, 便于融合基因翻译起始，是一种高效的蛋白表达载体，且便于目的蛋白的进一步分离纯化. 我们采用该系统成功地对CK2α′进行了原核表达，上清经谷胱甘肽琼脂糖4B亲和析柱纯化，得到具有生物活性的Mr 38 ku的目的蛋白，其功能和性质与已报道的CK2性质［3］和HL60细胞天然CK2一致. 本实验用GST融合表达方法,将不能在原核表达系统高效特异表达的基因成功表达，并且融合蛋白经一步亲和层析纯化即可得到的目的蛋白. 我们的研究结果与陈小文等［7］表达纯化人CK2α′亚基要经过磷酸纤维素离子交换柱、多聚赖氨酸2琼脂糖离子交换柱、肝素琼脂糖亲和柱和Sephacryl S200凝胶过滤层析四个步骤相比较，其纯化步骤要相对简单，且纯化成本也相对较低. 因此，本实验对于一些较难克隆表达纯化的基因具有一定的借鉴作用.
【参考文献】
［1］ Raaf J, Brunstein E, Issinger OG, et al. The CK2 alpha/CK2 beta Interface of Human Protein Kinase CK2 Harbors a Binding Pocket for Small Molecules［J］. Chem Biol, 2008, 15(2):111-117.
［2］ Torrecilla I, Spragg EJ, Poulin B, et al. Phosphorylation and regulation of a G proteincoupled receptor by protein kinase CK2［J］. J Cell Biol, 2007, 177(1):127-137.
［3］ 林小聪，刘新光，陈小文，等. 藤黄菌素体外对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用［J］. 第四军医大学学报, 2006, 27(7):593-595.
［4］ 陈小文,郑克勤,梁景耀,等. 小鼠蛋白激酶CK2β亚基的克隆、测序、表达及初步鉴定［J］. 基础医学与临床, 2003,23(4):392-398.
［5］ 阮杰，刘新光，梁念慈. 蛋白激酶CK2在信号转导中的作用及其与肿瘤发生的关系［J］. 中国药理学通报, 2007, 23(5):574-577.
［6］ 陈小文,刘新光,郑克勤，等. 小鼠蛋白激酶CK2α亚基的克隆、测序、表达及初步鉴定［J］. 癌症, 2002, 21(7):751-756.
［7］ 陈小文,刘新光,梁景耀,等. 人蛋白激酶CK2α′亚基在大肠杆菌中的克隆、表达及其重组蛋白的纯化与性质鉴定［J］. 中国生物化学与分子生物学报, 2004,20(2):176-182.
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