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条带, 说明VCC1已转入到SMMC7721细胞中(图2、 3)。
图2 各转染组细胞VCC1基因的mRNA水平变化（略）
M: DNA marker; 1, 2: 空白未转染SMMC7721细胞组; 3, 4: 转染pcDNA3.1(-)空载体组; 5, 6: 转染pcDNA3.1(-)/VCC1组.
图3 各转染组细胞VCC1基因蛋白水平变化（略）
M: 蛋白marker; 1: 转染pcDNA3.1(-)/VCC1组; 2: 转染pcDNA3.1(-)空载体组; 3: 空白未转染SMMC7721细胞组.
3 讨论
大量研究表明［2-4］, VEGF及趋化因子与肿瘤的血管发生、 细胞形态学、 细胞迁移、 凋亡等有密切联系。VCC1作为一个与VEGF相关的蛋白, 结构与CXC类趋化因子相似, 研究显示其在血管形成中扮演了重要角色, 而且可能在一些组织的肿瘤发生及免疫调节中具有重要作用［5］。为进一步研究VCC1过表达后对肿瘤细胞的生物学功能的影响, 在本实验中我们将此基因构建在真核细胞表达载体pcDNA3.1(-), 经限制性核酸内切酶酶切鉴定、 测序证实目的基因VCC1序列正确, 成功构建重组子pcDNA/VCC1 。然后将所构建的含VCC1 基因的重组质粒转染到SMMC7721细胞, 并用G418筛选稳定转染细胞株, 选择抗性克隆, 将新的克隆细胞挑选出扩大培养。由于VCC1 基因是一个在肿瘤广泛表达的基因, SMMC7721细胞中也有表达, 因此为了鉴定VCC1 基因是否已经转染到SMMC7721细胞中, 我们可以通过扩增G418抗性基因PGKneo序列来鉴定, 因为pcDNA3.1(-)中带有G418抗性基因PGKneo, 该序列是很特异的, 人的SMMC7721细胞中不含有该序列, 如果没有转染的细胞, 那么就扩增不出492 bp的特异条带。而且转染了VCC1 基因的SMMC7721细胞, 其VCC1目的条带比转染了 上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] 下一页 |
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